旨在克隆、表達馬泰勒蟲（Theileria equi）和駑巴貝斯蟲（Babesia caballi）半胱氨酸蛋白酶（cystein protease,CP）基因,并對其進行生物信息學預測和分析。提取馬泰勒蟲和駑巴貝斯蟲的DNA,以此為模板擴增目的基因。利用克隆技術和原核表達系統(tǒng)克隆表達CP,用尿素透析法進行純化。通過Dot blot驗證其與相應陽性血清特異性反應。應用MAGA軟件和Prot Param、TMHMM、SignalP-5.0、Antibody Epitope Prediction、SYFPEITHII、ProPred及EzMol^2.1等在線分析軟件分析T.equi-CP和B.caballi-CP的基因及其蛋白序列。成功構建了重組質粒GST-T.equi-CP和GST-B.caballi-CP,經SDS-PAGE試驗結果顯示該基因表達的蛋白以包涵體形式高效表達,并能與相應陽性血清特異性反應。對T.equi-CP和B.caballi-CP基因編碼蛋白進行系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn),與其他原蟲物種相比,系統(tǒng)發(fā)育分析結果與其原生動物學分類結果一致。經生物信息學分析預測顯... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學報. 2020,51(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

T.equi-CP和B.caballi-CP蛋白的3D模型構建

通過 T. equi-CP 基因同源物種氨基酸序列進化分析,結果如圖6所示,本文所研究的T. equi-CP與馬泰勒蟲在同一分支上屬于馬泰勒蟲半胱氨酸蛋白酶,與其遺傳距離最近的為Theileria equi strain WA(XP_004832412.1);馬泰勒蟲半胱氨酸蛋白酶與牛環(huán)形泰勒蟲進化關系最近,其次分別為尤氏泰勒蟲、東方泰勒蟲和小泰勒蟲,而巴貝斯蟲屬自成一支。圖3 誘導時間及IPTG濃度對GST-B. caballi-CP蛋白表達的影響

誘導時間及IPTG濃度對GST-B. caballi-CP蛋白表達的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]羊傳染性膿皰病毒NZ2毒株CBP蛋白結構分析與表位預測[J]. 成偉偉,陳伯祥,常攀峰,楊明,趙子惠.  中國動物檢疫. 2019(12)
[2]廣州管圓線蟲半胱氨酸蛋白酶AcCBL1和AcCBL2基因的克隆、表達及鑒定[J]. 白慧芳,柯琪文,陳韻秋,劉芷晴,張玲敏,吳春云,袁桂秀,詹希美,程梅.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2018(05)
[3]蜱半胱氨酸蛋白酶分子研究進展[J]. 于新茂,周金林.  中國動物傳染病學報. 2015(05)
[4]寄生蟲半胱氨酸蛋白酶研究進展[J]. 宋軍科,才學鵬,駱學農,林青,竇永喜,于三科.  動物醫(yī)學進展. 2011(12)
[5]華支睪吸蟲半胱氨酸蛋白酶基因克隆表達和血清學診斷效果[J]. 江文才,金小林,沈明學,曹漢鈞,徐祥珍,蔣崗,陶志勇,高琪.  中國血吸蟲病防治雜志. 2011(06)
[6]捻轉血矛線蟲的腸道抗原研究進展[J]. 李衛(wèi)華,汪明.  中國動物檢疫. 2004(08)
[7]寄生蟲的半胱氨酸蛋白酶[J]. 邱宗文.  國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊). 2003(04)

博士論文
[1]弓形蟲半胱氨酸蛋白酶Metacaspases功能及作用機制[D]. 李木子.中國農業(yè)大學 2017

碩士論文
[1]華支睪吸蟲半胱氨酸蛋白酶克隆表達、組織定位及免疫學特性研究[D]. 何勉.廣西醫(yī)科大學 2018
[2]旋毛蟲半胱氨酸蛋白酶TsCP1的克隆、表達及鑒定[D]. 曲自剛.中國農業(yè)科學院 2012
[3]惡性瘧原蟲半胱氨酸蛋白酶FP2的抑制劑篩選及其活性機理研究[D]. 陳曈.華東理工大學 2010
[4]鐮形扇頭蜱半胱氨酸蛋白酶基因的克隆及免疫效果研究[D]. 陳靈芝.安徽農業(yè)大學 2004



本文編號：3109281