寨卡病毒（ZIKV）是一種重要的人獸共患病病原。為了在原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)ZIKV C、prM和E蛋白并制備相應(yīng)多克隆抗體,本研究首先對ZIKV C、prM和E蛋白基因序列進(jìn)行密碼子優(yōu)化,合成后克隆至pMAL-c5x載體中,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化于E.coli ER2523,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE及Western blot進(jìn)行鑒定并通過MBP親和層析柱進(jìn)行純化;將純化蛋白免疫新西蘭大白兔,制備C、prM和E蛋白的兔源多克隆抗體;用IFA和Western blot檢測血清抗體效價(jià)及特異性。結(jié)果顯示:本研究利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了ZIKV C、prM和E蛋白,經(jīng)過MBP親和層析柱純化后獲得高純度的目的蛋白;將ZIKV C、prM和E蛋白免疫新西蘭大白兔后均誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性多克隆抗體,間接免疫熒光試驗(yàn)表明所制備多克隆抗體均能與ZIKV結(jié)合,IFA效價(jià)分別為1:1600,1:1600和1:3200;Western blot顯示制備的多克隆抗體能特異性識別ZIKV C、prM和E蛋白。該研究結(jié)果為進(jìn)一步開展ZIKV相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2020,28(05)北大核心

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【部分圖文】：

IFA鑒定C、prM、E蛋白多克隆抗體與ZIKV的反應(yīng)性

p MAL-c5x-ZIKV-C、p MAL-c5x-ZIKV-pr M和p MAL-c5x-ZIKV-E雙酶切鑒定

將pMAL-c5x-ZIKV-C、pMAL-c5x-ZIKV-prM和pMAL-c5x-ZIKV-E分別轉(zhuǎn)化至ER2523感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,分別取上清液和沉淀進(jìn)行SDS-PAGE電泳及Western blot鑒定,分析蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示,pMAL-c5x-ZIKV-C(圖2)、pMAL-c5x-ZIKV-prM(圖3)和pMAL-c5x-ZIKV-E(圖4)表達(dá)產(chǎn)物分別在55 kDa、60 kDa和100 kDa左右出現(xiàn)條帶,與預(yù)期大小一致。圖3 SDS-PAGE(A、B)和Western blot (C)驗(yàn)證可溶性ZIKV-pr M蛋白表達(dá)與純化


本文編號：3104739