沙門菌給養(yǎng)殖業(yè)和人類健康帶來嚴(yán)重危害。目前除抗生素外,對(duì)于沙門菌病的防制尚無有效辦法。疫苗,尤其是減毒活疫苗是一個(gè)研究方向。疫苗靶點(diǎn)選擇也是沙門菌疫苗研究的核心�；诖竽c菌素受體蛋白CirA在細(xì)菌生理上的重要作用,本研究以cirA基因?yàn)榘谢颉＠忙?Red同源重組技術(shù),構(gòu)建了C50336ΔcirA,并對(duì)其生物學(xué)特性、LD₅₀和免疫特性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。具體實(shí)施如下:1.腸炎沙門菌rCirA蛋白免疫保護(hù)力分析設(shè)計(jì)針對(duì)性引物擴(kuò)增cirA基因片段,并成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pEGX-6p-1-cirA,利用原核表達(dá)系統(tǒng),表達(dá)的rCirA蛋白免疫小鼠,并對(duì)免疫小鼠血清進(jìn)行抗體IgG檢測(cè);以C50336強(qiáng)毒株攻毒評(píng)估免疫效果。結(jié)果顯示,經(jīng)SDS-PAGE分析,在70 ku處出現(xiàn)目的蛋白條帶并為沉淀表達(dá);免疫小鼠抗體IgG水平持續(xù)上升;攻毒試驗(yàn)保護(hù)率僅為20%,表明rCirA蛋白對(duì)小鼠具有一定的免疫原型和保護(hù)力。2.腸炎沙門菌cirA基因缺失株的構(gòu)建及生物學(xué)特性分析本研究利用λ-Red同源重組技術(shù),構(gòu)建了腸炎沙門菌cirA基因缺失株以及回補(bǔ)株。研究發(fā)現(xiàn),cirA基因缺失株的生長速率和生... 

【文章來源】：河北科技師范學(xué)院河北省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

腸炎沙門菌cirA基因的PCR擴(kuò)增Fig2-1TheamplificationofcirAgeneofS.Enteritidis

第2章腸炎沙門菌rCirA蛋白免疫保護(hù)力18圖2-2重組質(zhì)粒pEGX-6p-1-cirA雙酶切驗(yàn)證Fig2-2VerificationofpEGX-6p-1-cirArecombinantplasmidbydoubleenzymedigestionM:DL2000PlusDNAMarker;1:pEGX-6p-1;2:pEGX-6p-1-cirA2.3.2rCirA重組蛋白的表達(dá)驗(yàn)證將重組載體pEGX-6p-1-cirA轉(zhuǎn)化E.coliBL21（DE3）表達(dá)菌株后誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE分析rCirA重組蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示，在70ku處呈現(xiàn)出與預(yù)期一致的目的蛋白條帶，而誘導(dǎo)的空載體菌株無此蛋白條帶（圖2-3）。表明rCirA重組蛋白正確表達(dá)。圖2-3rCirA蛋白表達(dá)的SDS-PAGE分析Fig2-3SDS-PAGEanalysisofrCirAproteinexpressionM:PerstainedproteinMarker;1:pEGX-6p-1/BL21;2:pEGX-6p-1-cirA/BL212.3.3rCirA重組蛋白的可溶性分析對(duì)rCirA重組蛋白進(jìn)行可溶性分析，進(jìn)行SDS-PAGE分析。結(jié)果顯示，rCirA菌體蛋白沉淀中出現(xiàn)較濃的特異蛋白質(zhì)條帶，而上清中無該條帶（圖2-4）。表明rCirA重組蛋白為沉淀表達(dá)。

第2章腸炎沙門菌rCirA蛋白免疫保護(hù)力18圖2-2重組質(zhì)粒pEGX-6p-1-cirA雙酶切驗(yàn)證Fig2-2VerificationofpEGX-6p-1-cirArecombinantplasmidbydoubleenzymedigestionM:DL2000PlusDNAMarker;1:pEGX-6p-1;2:pEGX-6p-1-cirA2.3.2rCirA重組蛋白的表達(dá)驗(yàn)證將重組載體pEGX-6p-1-cirA轉(zhuǎn)化E.coliBL21（DE3）表達(dá)菌株后誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE分析rCirA重組蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示，在70ku處呈現(xiàn)出與預(yù)期一致的目的蛋白條帶，而誘導(dǎo)的空載體菌株無此蛋白條帶（圖2-3）。表明rCirA重組蛋白正確表達(dá)。圖2-3rCirA蛋白表達(dá)的SDS-PAGE分析Fig2-3SDS-PAGEanalysisofrCirAproteinexpressionM:PerstainedproteinMarker;1:pEGX-6p-1/BL21;2:pEGX-6p-1-cirA/BL212.3.3rCirA重組蛋白的可溶性分析對(duì)rCirA重組蛋白進(jìn)行可溶性分析，進(jìn)行SDS-PAGE分析。結(jié)果顯示，rCirA菌體蛋白沉淀中出現(xiàn)較濃的特異蛋白質(zhì)條帶，而上清中無該條帶（圖2-4）。表明rCirA重組蛋白為沉淀表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腸炎沙門菌pagC基因缺失株構(gòu)建及其相關(guān)生物學(xué)特性研究[J]. 李永慧,蘇碩青,李巧玲,吳同壘,張志強(qiáng).  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2019(22)
[2]復(fù)方中藥混菌發(fā)酵制劑對(duì)AA肉雞紅細(xì)胞免疫功能的影響[J]. 張桂枝,邢啟銀,靳雙星.  中國獸醫(yī)雜志. 2016(07)

博士論文
[1]腸炎沙門氏菌生物被膜形成相關(guān)基因鑒定、缺失株構(gòu)建及生物學(xué)特性研究[D]. 董洪燕.揚(yáng)州大學(xué) 2011

碩士論文
[1]腸炎沙門菌nmpC基因缺失株的生物學(xué)特性及免疫效果分析[D]. 蘇碩青.河北科技師范學(xué)院 2019
[2]雞細(xì)胞免疫應(yīng)答檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用[D]. 唐娟.揚(yáng)州大學(xué) 2019



本文編號(hào)：3104188