蛋雞（Gallus gallus domesticus）輸卵管炎與輸卵管囊腫是危害養(yǎng)禽業(yè)的重要疫病,引起該病的病原較多,其中鴨源雞桿菌（Gallibacterium anatis）是比較常見的病原。目前,乳酸菌作為食品級(jí)的表達(dá)載體在研制活載體疫苗中被廣泛應(yīng)用。本研究以干酪乳酸桿菌（Lactobacillus casei, CECT5276）作為遞呈抗原的活菌載體,構(gòu)建能夠穩(wěn)定表達(dá)鴨源雞桿菌菌毛FlfA蛋白的重組干酪乳酸桿菌,并初步評(píng)價(jià)其免疫效果。首先將鴨源雞桿菌flfA基因克隆至穿梭表達(dá)質(zhì)粒pMG36e,然后電轉(zhuǎn)化干酪乳酸桿菌,對(duì)重組菌中FlfA蛋白表達(dá)和重組菌生長狀況、穩(wěn)定性、存留性能及耐受力等進(jìn)行檢測分析,初步評(píng)價(jià)重組菌的免疫效果。SDS-PAGE和Western blot分析表明,重組干酪乳酸桿菌成功表達(dá)分子量約為20.3 kD的融合蛋白,該蛋白能與兔抗鴨源雞桿菌陽性血清發(fā)生反應(yīng),具有反應(yīng)原性;生長狀況及穩(wěn)定性等分析顯示,目的基因的插入對(duì)干酪乳酸桿菌生長無影響,可在宿主菌中穩(wěn)定遺傳;在模擬腸液、胃液及高鹽環(huán)境中均有較好的耐受力;免疫后第14、28、42 d免疫血清及腸道黏液的特異... 

【文章來源】：農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2020,28(09)北大核心CSCD

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重組質(zhì)粒pMG36e-flfA的PCR鑒定(A)和酶切鑒定(B)

圖1 重組質(zhì)粒pMG36e-flfA的PCR鑒定(A)和酶切鑒定(B)重組菌在含紅霉素的MRS培養(yǎng)基中連續(xù)傳20代，隔代抽提細(xì)菌基因組DNA，用特異性引物進(jìn)行PCR鑒定。結(jié)果顯示，各代次重組菌中均能擴(kuò)增出長度約549 bp的目的條帶(圖5)，提示flfA基因能在干酪乳酸桿菌中穩(wěn)定遺傳。

重組桿菌在不同鹽濃度的培養(yǎng)基中靜置培養(yǎng)5 h，涂板計(jì)數(shù)，對(duì)滲透壓耐受能力進(jìn)行分析(圖8)。與對(duì)照組比較，不同濃度NaCl處理的重組菌計(jì)數(shù)有所變化，其中在7%及9%NaCl培養(yǎng)基中重組菌數(shù)量明顯下降(P<0.05)，但在5%NaCl環(huán)境中耐受力較好。2.9 免疫雛雞血清中特異性IgG抗體檢測

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]串聯(lián)IL-2的犬瘟熱病毒F-H融合基因重組乳酸桿菌的構(gòu)建與表達(dá)[J]. 蘇鳳艷,李哲,李艷芝,王春鳳,曾范利.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版). 2017(04)
[2]牛病毒性腹瀉病毒E0基因重組表達(dá)質(zhì)粒pMG36e-E0的構(gòu)建與免疫原性分析[J]. 蔣祿峰,趙月蘭,李蘇楠,吉星煜,張晶,張?jiān)?王建永,包永占,秦建華.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(11)
[3]共表達(dá)鵝細(xì)小病毒VP3-gIL2重組乳酸桿菌的構(gòu)建及其口服免疫評(píng)價(jià)[J]. 丁軻,余祖華,李旺,閆文朝,王臣,趙戰(zhàn)勤,程相朝,張春杰,王天奇,程安春,汪銘書.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(02)
[4]產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素在干酪乳桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)及其小鼠口服免疫力[J]. 李曉靜,夏春麗,李一經(jīng).  微生物學(xué)報(bào). 2009(08)
[5]沙門氏菌DNA提取及PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化[J]. 邵碧英,陳彬,湯敏英,吳謙,張?bào)w銀.  食品科學(xué). 2007(07)
[6]動(dòng)物黏膜免疫細(xì)胞研究進(jìn)展[J]. 董玉蘭,王樹迎.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2003(01)

碩士論文
[1]共表達(dá)豬細(xì)小病毒VP2與大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位重組乳酸桿菌構(gòu)建及其免疫學(xué)初步評(píng)價(jià)[D]. 王相清.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3096038