豬細(xì)小病毒1型（Porcine parvovirus 1, PPV1）可導(dǎo)致母豬繁殖功能性障礙,給全球的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來國內(nèi)外陸續(xù)報道出多種新型的豬細(xì)小病毒,其中包括豬細(xì)小病毒2型（Porcine parvovirus 2, PPV2）、豬細(xì)小病毒3型（Porcine parvovirus 3, PPV3）、豬細(xì)小病毒4型（Porcine parvovirus 4, PPV4）、豬類博卡病毒（Porcine boca-like virus, PBo-likeV）和豬博卡病毒（Porcine bocavirus, PBoV）等。本研究同時對上述五種新型豬細(xì)小病毒在國內(nèi)的流行概況和變異程度進(jìn)行了調(diào)研,豐富了其分子流行病學(xué)參考資料；利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)同時表達(dá)了PPV3VP2完整蛋白和截短蛋白以研究其免疫原性,為PPV3亞單位疫苗的研發(fā)奠定了理論基礎(chǔ)：利用PPV3重組VP2蛋白pET-28a-540建立了間接ELISA方法,為PPV3的檢測提供了血清學(xué)檢測手段。具體研究內(nèi)容如下：1.新型豬細(xì)小病毒的分子流行病學(xué)調(diào)查本研究對2008～2013年期間的308份... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 豬細(xì)小病毒的研究進(jìn)展
    （一） 豬細(xì)小病毒1型
        1 PPV1病原學(xué)特性
            1.1 病毒分類
            1.2 病毒形態(tài)與理化特性
            1.3 PPV1分子生物學(xué)研究進(jìn)展
            1.4 抗原性
            1.5 PPV1致病性與組織嗜性
            1.6 PPV1體外培養(yǎng)特性
            1.7 PPV1流行病學(xué)特性
        2 PPV1診斷方法
            2.1 病毒分離
            2.2 血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗
            2.3 中和試驗（SN）
            2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）
            2.5 乳膠凝集試驗（LAT）
            2.6 膠體金標(biāo)記技術(shù)（SECGA）
            2.7 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測技術(shù)（PCR）
            2.8 核酸探針技術(shù)
            2.9 免疫熒光技術(shù)（IFA）
        3 PPV1疫苗研究
            3.1 弱毒疫苗
            3.2 滅活疫苗
            3.3 基因工程疫苗
    （二） 豬細(xì)小病毒2型
    （三） 豬細(xì)小病毒3型
    （四） 豬細(xì)小病毒4型
    （五） 豬類博卡病毒
    （六） 豬博卡病毒
    參考文獻(xiàn)
第二章 新型豬細(xì)小病毒的分子流行病學(xué)調(diào)查
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 病料
            1.1.2 試劑
        1.2 方法
            1.2.1 DNA的提取
            1.2.2 PCR檢測
            1.2.3 序列測定
    2 結(jié)果
        2.1 PCR結(jié)果
            2.1.1 PPV2感染情況
            2.1.2 PPV3感染情況
            2.1.3 PPV4感染情況
            2.1.4 PBo-likeV感染情況
            2.1.5 PBoV感染情況
        2.2 測序結(jié)果
            2.2.1 PPV2變異程度
            2.2.2 PPV3變異程度
            2.2.3 PPV4變異程度
            2.2.4 PBo-likeV變異程度
            2.2.5 PBoV變異程度
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
    ABSTRACT
第三章 豬細(xì)小病毒3型VP2蛋白的原核表達(dá)與免疫特性研究
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 主要試劑
        1.2 方法
            1.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
            1.2.2 重組質(zhì)粒的鑒定
            1.2.3 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
            1.2.4 重組蛋白的表達(dá)
            1.2.5 重組蛋白的純化
            1.2.6 小鼠免疫試驗
    2 試驗結(jié)果
        2.1 重組質(zhì)粒的鑒定
            2.1.1 目的基因的擴增
            2.1.2 重組質(zhì)粒的PCR鑒定
            2.1.3 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.2 重組蛋白的表達(dá)
            2.2.1 重組蛋白的表達(dá)鑒定
            2.2.2 重組蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化
        2.3 重組蛋白的純化
        2.4 抗體效價測定
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
    ABSTRACT
第四章 豬細(xì)小病毒3型VP2蛋白的真核表達(dá)與免疫特性研究
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 主要試劑
        1.2 方法
            1.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
            1.2.2 重組質(zhì)粒的鑒定
            1.2.3 重組Bacmid的構(gòu)建與鑒定
            1.2.4 重組桿狀病毒的獲得與擴增
            1.2.5 重組蛋白在Sf9細(xì)胞中的表達(dá)和鑒定
            1.2.6 重組蛋白的純化
            1.2.7 免疫特性的研究
    2 試驗結(jié)果
        2.1 重組質(zhì)粒的鑒定
            2.1.1 重組質(zhì)粒的PCR鑒定
            2.1.2 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.2 重組Bacmid的PCR鑒定
        2.3 重組蛋白的表達(dá)與鑒定
        2.4 重組蛋白的純化
        2.5 真核蛋白免疫原性的研究
            2.5.1 抗體效價的測定
            2.5.2 細(xì)胞因子濃度的測定
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
    ABSTRACT
第五章 豬細(xì)小病毒3型間接ELISA抗體檢測方法的建立和應(yīng)用
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 抗原與抗體
            1.1.2 試劑與儀器
        1.2 間接ELISA方法的建立及條件優(yōu)化
            1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)陰陽性血清的篩選
            1.2.2 抗原最佳包被濃度和血清最佳稀釋度的篩選
            1.2.3 最佳抗原包被條件的篩選
            1.2.4 最佳封閉液的篩選
            1.2.5 最佳封閉條件的篩選
            1.2.6 最佳一抗作用條件的篩選
            1.2.7 二抗最佳作用濃度的篩選
            1.2.8 二抗最佳作用條件的篩選
            1.2.9 最佳底物顯色條件的篩選
            1.2.10 臨界值的確定
        1.3 特異性試驗
        1.4 重復(fù)性試驗
            1.4.1 批內(nèi)重復(fù)性試驗
            1.4.2 批間重復(fù)性試驗
        1.5 臨床樣品的檢測
    2 結(jié)果
        2.1 間接ELISA最佳反應(yīng)條件的確定
            2.1.1 最佳抗原包被濃度和待檢血清最佳稀釋度的確定
            2.1.2 抗原最佳包被條件的確定
            2.1.3 最佳封閉液的確定
            2.1.4 最佳封閉條件的確定
            2.1.5 最佳血清作用條件的確定
            2.1.6 HRP-SPA最佳稀釋度的確定
            2.1.7 HRP-SPA最佳反應(yīng)條件的確定
            2.1.8 TMB最佳顯色條件的確定
            2.1.9 臨界值的確定
        2.2 特異性試驗
        2.3 重復(fù)性試驗
            2.3.1 批內(nèi)重復(fù)性試驗
            2.3.2 批間重復(fù)性試驗
        2.4 臨床血清樣品的檢測
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
    ABSTRACT
全文總結(jié)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新型豬細(xì)小病毒感染的分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 崔鵬超,何玉,劉捷,李玉峰,姜平,王先煒.  畜牧與獸醫(yī). 2014(04)
[2]豬博卡病毒PCR檢測方法的建立及其初步流行病學(xué)調(diào)查[J]. 胡軍勇,張倩,王丹丹,涂志勤,胡睿銘,湯細(xì)彪,吳斌.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2012(08)
[3]牛副流感病毒3型HN基因原核表達(dá)及間接ELISA方法建立[J]. 周玉龍,任亞超,朱戰(zhàn)波,侯喜林,王密,耿晶,樸范澤,李森.  病毒學(xué)報. 2012(01)
[4]豬支原體重組MSG1蛋白間接ELISA檢測方法的建立[J]. 張長瑩,李玉峰,華榮蓉,劉捷,姜平.  畜牧與獸醫(yī). 2011(02)
[5]豬博卡病毒PCR檢測方法的建立及其應(yīng)用[J]. 翟少倫,岳城,韋祖樟,冉多良,龍進(jìn)學(xué),藺濤,鄧宇,孫利廠,黃律,袁世山.  中國動物傳染病學(xué)報. 2010(02)
[6]間接ELISA檢測犬細(xì)小病毒病血清抗體方法的建立[J]. 劉劍郁,李曉成,陳德坤,張燕霞,陳杰,吳發(fā)興.  中國動物檢疫. 2006(03)
[7]豬細(xì)小病毒SC-1株VP2基因的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 羅燕,郭萬柱,劉艷麗,殷華平.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2005(08)
[8]Baculovirus as a highly efficient expression vector in insect and mammalian cells[J]. Yu-chen HU~1 Department of Chemical Engineering,National Tsing Hua University,Hsinchu,Taiwan,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2005(04)
[9]豬細(xì)小病毒PCR檢測方法的建立與應(yīng)用[J]. 趙俊龍,陳煥春,呂建強,邱德新,周復(fù)春.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2003(02)
[10]豬細(xì)小病毒VP2蛋白在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)及其特性[J]. 呂建強,陳煥春,趙俊龍,肖少波,王革非.  微生物學(xué)報. 2002(06)

博士論文
[1]豬細(xì)小病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和結(jié)構(gòu)蛋白VP2的研究[D]. 卿柳庭.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[2]豬細(xì)小病毒基因組序列測定及結(jié)構(gòu)蛋白基因的克隆、表達(dá)與基因免疫研究[D]. 趙俊龍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2001



本文編號：3052717