發(fā)布時(shí)間：2021-02-26 11:27

　　為了研究豬附紅細(xì)胞體eno基因重組蛋白的免疫效果,本試驗(yàn)將豬附紅細(xì)胞體eno基因與pET-15b載體進(jìn)行連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞。對表達(dá)菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)、純化,利用純化后的豬附紅細(xì)胞體eno重組蛋白（命名為rMseno）對小鼠進(jìn)行免疫,從而評價(jià)該重組蛋白在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的免疫應(yīng)答水平。試驗(yàn)將20只4周齡的雄性昆明小鼠隨機(jī)分為A、B、C、D 4個(gè)組。免疫A組接種純化后的重組蛋白rMseno;免疫B組接種經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后的重組菌E.coli-Mseno;對照C組接種等量PBS;對照D組接種未經(jīng)過誘導(dǎo)表達(dá)的重組菌E.coli-Mseno。通過ELISA檢測方法分別測定血清中抗豬附紅細(xì)胞體特異抗體水平及γ干擾素（IFN-γ）和白細(xì)胞介素4（IL-4）細(xì)胞因子水平,最后通過脾臟淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)來反映小鼠體內(nèi)T淋巴細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果顯示,構(gòu)建的重組pET-15b-eno質(zhì)粒目的基因片段大小為1 632 bp,與預(yù)期大小相同;純化的重組蛋白rMseno大小為61 ku,并能夠被鼠抗豬附紅細(xì)胞體血清所識(shí)別;免疫A組和免疫B組小鼠血清中抗豬附紅細(xì)胞體特異抗體水平,IFN-γ、IL-4細(xì)胞... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pET-15b-eno的PCR及雙酶切鑒定結(jié)果

不同免疫組小鼠血清IFN-γ的水平

收集不同濃度咪唑過柱后的洗脫液,將各組分進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測。結(jié)果如圖3所示,用含20和50 mmol/L咪唑的洗脫液能充分的將雜蛋白洗掉,得到較好的純化效果。圖2 重組質(zhì)粒pET-15b-eno的PCR及雙酶切鑒定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3052522