新疆北疆地區(qū)牛乳頭瘤病毒流行株基因分型及其衣殼蛋白表達研究
發(fā)布時間：2021-02-23 21:41
牛乳頭狀瘤是由牛乳頭瘤病毒（Bovine papillomavirus，BPV）所引起的一種牛體表或部分黏膜發(fā)生慢性增生性腫瘤病，世界各地均有該病的發(fā)生，因損害皮革質(zhì)量和降低動物體質(zhì)而給養(yǎng)牛業(yè)造成較大的經(jīng)濟損失。根據(jù)BPV L1蛋白基因序列，至今已被鑒定的BPV基因型有13種，還有很多未分類的假定基因型。目前，尚無有效疫苗來預(yù)防牛乳頭瘤病的發(fā)生。新疆是中國五大牧區(qū)之一，奶牛存欄數(shù)達280萬頭左右，疑似BPV感染的病例在規(guī)�；膛鲋袝r常發(fā)生，然而至今尚無關(guān)于奶牛感染BPV基因分型及其疫苗的研究報道，因此開展新疆地區(qū)牛感染BPV的基因分型及BPV疫苗研究具有十分重要的意義。為了弄清新疆北疆地區(qū)牛感染BPV的基因型，本研究對新疆北疆地區(qū)牛乳頭狀瘤疑似病料進行了病理組織學(xué)檢查和PCR檢測，并對新疆北疆BPV流行株進行了基因分型。對BPV新疆流行株全基因組進行克隆。將BPV2衣殼蛋白L1基因克隆入原核表達載體pGEX4T-1以及真核表達載體pcDNA3.1（+）中，分別在大腸桿菌表達系統(tǒng)以及BHK-21細胞中誘導(dǎo)表達，對原核表達的重組蛋白進行Western blot鑒定，對真核表達的重組蛋白進...
【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
BPV基因組結(jié)構(gòu)
新疆北疆地區(qū)牛乳頭瘤病毒流行株基因分型及其衣殼蛋白表達研究利用 DNAMAN 軟件找出簡并引物 FAP59/FAP64 在 BPV1-13 中所對應(yīng)的核苷酸片段。本研究將檢測出的這株假定新型乳頭瘤病毒的部分序列提交到 GenBank(KF751804)命名為 BPV/CHI-SW1。遺傳進化樹分析采用 NJ 法（Neighbor-JoiningMethod）（Thompson and Neel, 1997），將 BPV/CHI-SW1 與 BPV1 至 BPV13 及16 種假定新型乳頭瘤病毒 L1 基因序列進行比對分析并利用 MEGA 5 軟件構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，bootstrap 重復(fù)次數(shù)為 1000。2 結(jié)果2.1 奶牛乳頭狀瘤臨床癥狀觀察患病牛顯示牛乳頭狀腫瘤在口吻、眼、頸部、肩部、后背、后蹄、乳頭均有發(fā)生，嚴重病例在面部、頸部、肩部均見到大面積乳頭狀瘤，腫瘤 0.5 cm至 7 cm直徑大小不等，有的連成一片，瘤體多呈結(jié)節(jié)狀及菜花狀，顏色多呈白色或灰褐色（圖 1-1）。大部分后備牛感染并出現(xiàn)乳頭狀腫瘤癥狀，個別牛癥狀明顯。AB C
2.3 PCR 檢測結(jié)果及序列分析56 份牛乳頭狀瘤疑似病料中，使用 FAP59/FAP64 引物，經(jīng) 2.0％的瓊脂糖凝膠電泳檢測，所擴增的目的 PCR 產(chǎn)物的大小分別約為 450 bp（圖 1-3）。C D圖 1-2 組織病理學(xué)觀察（HE 染色 100x）Fig. 1-2 Histopathological examination of papillomas（100x）A 表皮角質(zhì)層增生和棘層細胞肥厚。B 挖空細胞（黑色箭頭指示）。A, illustrate epidermal hyperplasia with marked acanthosis in the stratum corneum andstratum spinosum are seen. B, koilocytes are indicated by black arrows.
【參考文獻】：
期刊論文
[1]病毒樣顆粒技術(shù)應(yīng)用的研究進展[J]. 劉春國,閻麗輝,曹殿軍. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2005(02)
[2]Construction and Production of FluorescentPapillom avirus-like Particles[J]. PENG Shiwen , ZHOU Jian , Ian H Frazer * Department of Pediatrics, Xiehe Hospital, Tongji Medical University, Wuhan 430022 * Center for Immunology and Cancer Research, University of Queensland, Princess Alexandra Hospital, Woolloongabba, Qld. Journal of Tongji Medical University. 1999(03)
本文編號：3048277
【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
BPV基因組結(jié)構(gòu)
新疆北疆地區(qū)牛乳頭瘤病毒流行株基因分型及其衣殼蛋白表達研究利用 DNAMAN 軟件找出簡并引物 FAP59/FAP64 在 BPV1-13 中所對應(yīng)的核苷酸片段。本研究將檢測出的這株假定新型乳頭瘤病毒的部分序列提交到 GenBank(KF751804)命名為 BPV/CHI-SW1。遺傳進化樹分析采用 NJ 法（Neighbor-JoiningMethod）（Thompson and Neel, 1997），將 BPV/CHI-SW1 與 BPV1 至 BPV13 及16 種假定新型乳頭瘤病毒 L1 基因序列進行比對分析并利用 MEGA 5 軟件構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，bootstrap 重復(fù)次數(shù)為 1000。2 結(jié)果2.1 奶牛乳頭狀瘤臨床癥狀觀察患病牛顯示牛乳頭狀腫瘤在口吻、眼、頸部、肩部、后背、后蹄、乳頭均有發(fā)生，嚴重病例在面部、頸部、肩部均見到大面積乳頭狀瘤，腫瘤 0.5 cm至 7 cm直徑大小不等，有的連成一片，瘤體多呈結(jié)節(jié)狀及菜花狀，顏色多呈白色或灰褐色（圖 1-1）。大部分后備牛感染并出現(xiàn)乳頭狀腫瘤癥狀，個別牛癥狀明顯。AB C
2.3 PCR 檢測結(jié)果及序列分析56 份牛乳頭狀瘤疑似病料中，使用 FAP59/FAP64 引物，經(jīng) 2.0％的瓊脂糖凝膠電泳檢測，所擴增的目的 PCR 產(chǎn)物的大小分別約為 450 bp（圖 1-3）。C D圖 1-2 組織病理學(xué)觀察（HE 染色 100x）Fig. 1-2 Histopathological examination of papillomas（100x）A 表皮角質(zhì)層增生和棘層細胞肥厚。B 挖空細胞（黑色箭頭指示）。A, illustrate epidermal hyperplasia with marked acanthosis in the stratum corneum andstratum spinosum are seen. B, koilocytes are indicated by black arrows.
【參考文獻】：
期刊論文
[1]病毒樣顆粒技術(shù)應(yīng)用的研究進展[J]. 劉春國,閻麗輝,曹殿軍. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2005(02)
[2]Construction and Production of FluorescentPapillom avirus-like Particles[J]. PENG Shiwen , ZHOU Jian , Ian H Frazer * Department of Pediatrics, Xiehe Hospital, Tongji Medical University, Wuhan 430022 * Center for Immunology and Cancer Research, University of Queensland, Princess Alexandra Hospital, Woolloongabba, Qld. Journal of Tongji Medical University. 1999(03)
本文編號：3048277
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