隨著現(xiàn)代規(guī)�；B(yǎng)殖程度的不斷提高，氧化應(yīng)激在商品豬生產(chǎn)中的危害日益顯現(xiàn)。銅鋅超氧化物歧化酶（CuZnSOD）是一種重要的抗氧化酶，在維持生物體內(nèi)氧自由基平衡方面發(fā)揮重要作用。CuZnSOD廣泛分布于細胞質(zhì)基質(zhì)中，約占SOD總量的90%。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，許多物種的CuZnSOD基因組序列已被克隆出來。目前CuZnSOD基因的研究多集中于其功能方面，而對于表達調(diào)控機制并不清楚。為了進一步研究CuZnSOD基因的結(jié)構(gòu)與功能以及驗證CuZnSOD基因在提高肌肉抗氧化能力方面的功能，本研究進行了以下研究，一是PCR克隆CuZnSOD基因的啟動子區(qū)，對其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制進行了探討，二是通過制備轉(zhuǎn)CuZnSOD基因肉兔模型來研究并驗證CuZnSOD對肌肉抗氧化性能等肉質(zhì)性狀影響的重要功能和育種價值。主要研究結(jié)果如下：1.利用PCR方法從萊蕪豬基因組克隆CuZnSOD基因5′上游853bp的片段，然后通過巢式PCR方法獲得5′末端逐漸截短的啟動子系列片段，并將這些片段定向插入到熒光素酶報告基因表達載體（PGL3-Basic）中。瞬時轉(zhuǎn)染NIH/3T3細胞，雙熒光素酶報告基因檢測啟動子活性結(jié)果顯示，-3... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CuZnSOD基因啟動子PCR檢測結(jié)果

圖 1 CuZnSOD 基因啟動子 PCR 檢測結(jié)果Fig.1 PCR results of CuZnSOD gene promoter豬 CuZnSOD 基因 5′端序列的生物信息學分析研究采用 PCR方法從豬基因組克隆得到 CuZnSOD基因5′上游調(diào)控區(qū) 853生物信息學軟件分析發(fā)現(xiàn)，在豬 CuZnSOD 基因 5′端-87bp 和-266bp 處存錄起始位點（TSS），缺乏經(jīng)典的 CAAT-box 和 GC-box 保守序列，但檢測box（圖 2）。

圖 3 PCR 擴增 CuZnSOD 基因 5′端不同長度缺失片段 2000bp DNA marker；1: 853bp；2: 753bp；3: 653bp；4: 533bp；5: 453bp；6: 353bp；7: 2Figure.3 PCR amplification of various length deletion fragments of CuZnSOD gene promoter素酶表達載體的構(gòu)建及酶切鑒定的熒光素酶報告基因載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶 Mlu I 和 Bgl II 雙酶切，糖凝膠電泳分離（圖 4）。檢測結(jié)果表明，酶切下的目的片段大小與體進行測序，測序結(jié)果亦表明插入片段序列及方向正確無誤。圖 4 重組載體的酶切鑒定NA marker；M2: 10000bp DNA marker；1: 853bp；2: 753bp；3: 653bp；4: 533bp；5: 4537: 233bpFigure.4 Identification of recombinant plasmids with digestion

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]利用精子載體法制備轉(zhuǎn)基因小鼠疾病模型的初步研究[D]. 董煥聲.萊陽農(nóng)學院 2006
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本文編號：3039701