發(fā)布時間：2021-02-16 20:45

　　鴨疫里默氏桿菌病是由鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer, RA）引起的,廣泛分布于世界各個養(yǎng)鴨國家的,目前最重要的傳染病之一。RA菌株的血清型眾多,目前為止,共報道有21個血清型,各血清型之間無交叉保護。本實驗室前期進行的血清學(xué)研究結(jié)果表明流行菌株的優(yōu)勢血清型是血清1、2和10型。然而,我們對于鴨疫里默氏桿菌的分子致病機制還知之甚少。本研究檢測了鴨疫里默氏桿菌（RA）10個基因在不同菌株間的分布并進行序列分析,研究其在不同菌株中的保守性。研究發(fā)現(xiàn)了3個鴨疫里默氏桿菌的具有高度保守性的基因：lipid A、 luxE和tctR;6個可能的血清型相關(guān)基因：TR、luxE、IS1、tctR、luxrl和TA；以及5個可能的毒力相關(guān)基因：cwaH、lipid A、luxE、IS1和tctR。同時,發(fā)現(xiàn)luxE基因既可能與細菌的致病性相關(guān),又可能與細菌的血清型相關(guān)。因此,我們進一步研究了該基因?qū)A的生物學(xué)特性影響。本文采用同源重組的方法來構(gòu)建鴨疫里默氏桿菌Yb2株的luxE基因缺失株Yb2△luxE和luxE基因回復(fù)株cYb2△luxE。具體方法為：通過PCR擴增... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
圖標清單
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 概述
        1.1.1 病原學(xué)
        1.1.2 血清型
    1.2 全基因組序列的發(fā)表
    1.3 毒力因子
    1.4 Acyl-protein synthetases和Acyl transferase的研究進展
        1.4.1 Lux操縱子的概述
        1.4.2 發(fā)光細菌中l(wèi)uxE基因的研究進展
        1.4.3 脂多糖酰基化與免疫應(yīng)答的關(guān)系
    1.5 展望
第二章 鴨疫里默氏桿菌10個基因在菌株中的分布及序列分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 基因選擇、引物設(shè)計與合成
    2.2 試驗方法
        2.2.1 測定10個基因在RA菌株中的分布情況
        2.2.2 PCR產(chǎn)物的純化與克隆
        2.2.3 序列分析和系統(tǒng)進化樹的建立
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 10個基因在RA菌株中的分布情況
        2.3.2 PCR產(chǎn)物的克隆和鑒定
        2.3.3 序列測定與分析
        2.3.4 系統(tǒng)進化樹的繪制
    2.4 討論
第三章 鴨疫里默氏桿菌LUXE基因缺失株的構(gòu)建及生物學(xué)特性分析
    3.1 材料
        3.1.1 菌株和培養(yǎng)條件
        3.1.2 主要酶、載體及試劑
        3.1.3 主要培養(yǎng)基及緩沖液的配制
        3.1.4 抗生素及使用濃度
        3.1.5 主要儀器設(shè)備
        3.1.6 PCR引物
    3.2 試驗方法
        3.2.1 提取鴨疫里默氏桿菌Yb2株基因組
        3.2.2 鴨疫里默氏桿菌Yb2株luxE基因的克隆及測序
        3.2.3 鴨疫里默氏桿菌Yb2 luxE基因同源性左右臂片段的克隆
        3.2.4 壯觀霉素抗性基因（Spc）的擴增與序列測定
        3.2.5 重組質(zhì)粒pGEM-T easy-luxE-L-Spc-R的構(gòu)建
        3.2.6 自殺性重組質(zhì)粒pDS132-luxE-LSR的構(gòu)建
        3.2.7 鴨疫里默氏桿菌Yb2株△luxE基因缺失株的篩選及鑒定
        3.2.8 鴨疫里默氏桿菌Yb2△luxE基因缺失株的基因互補試驗
        3.2.9 檢測luxE基因缺失對上下游基因的影響
        3.2.10 鴨疫里默氏桿菌Yb2△luxE以及cYb2△luxE的生物學(xué)特性研究
    3.3 試驗結(jié)果
        3.3.1 鴨疫里默氏桿菌Yb2 luxE基因同源性左右臂片段的克隆
        3.3.2 壯觀霉素抗性基因（Spc）的擴增
        3.3.3 重組質(zhì)粒pGEM-T easy-LSR的構(gòu)建
        3.3.4 自殺性重組質(zhì)粒pDS132-luxE-LSR
        3.3.5 Yb2△luxE基因缺失株的篩選及鑒定
        3.3.6 Yb2△luxE基因缺失株的基因互補試驗
        3.3.7 熒光定量檢測luxE基因缺失對上下游基因的影響
        3.3.8 鴨疫里默氏桿菌Yb2△luxE以及cYb2△luxE的生物學(xué)特性研究
    3.4 討論
全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]血清10型鴨疫里默氏桿菌滅活油乳劑疫苗的研制[J]. 王小蘭,劉蕾,劉海文,苗雙,胡青海,韓先干,丁鏟,于圣青.  中國家禽. 2012(15)
[2]血清1型鴨疫里默氏桿菌滅活油乳劑疫苗的研制[J]. 王小蘭,胡青海,童永亮,韓先干,丁鏟,于圣青.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2012(04)
[3]血清2型鴨疫里默氏桿菌制苗用菌株的篩選及滅活油乳劑疫苗的研制[J]. 王小蘭,胡青海,韓先干,丁鏟,于圣青.  中國動物傳染病學(xué)報. 2012(01)
[4]�；D(zhuǎn)移酶研究[J]. 范東東,孫銘娟,王梁華,焦炳華.  生命的化學(xué). 2008(06)
[5]Effect of Porphyromonas gingivalis PrtC on cytokine expression in ECV304 endothelial cells and its level in subgingival plaques from patients with chronic periodontitis[J]. Yan-min WU~2,Li-li CHEN~(2,6),Jie YAN~(3,6),Chun-yan ZHUANG~4,Zhi-yuan GU~5~2 Department of Stomatology,the Second Affiliated Hospital,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310009,China;~3 Depart-ment of Medical Microbiology and Parasitology,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310006,China;~4 Department ofStomatology,the Affiliated Hospital of the School of Medicine,Ningbo University,Ningbo 315020,China;~5 Department of Oral andMaxillofacial Surgery,the Affiliated Hospital of Stomatology,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310006,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2007(07)
[6]7型鴨疫里氏桿菌分離株的鑒定[J]. 張大丙,郭玉璞.  中國獸醫(yī)雜志. 2003(05)
[7]血清8型鴨疫里墨氏桿菌在我國的發(fā)現(xiàn)及其病原特性研究[J]. 汪銘書,程安春,陳孝躍,劉兆宇,方鵬飛,郭宇飛.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2003(01)
[8]血清4型鴨疫里默氏桿菌在我國的發(fā)現(xiàn)及其病原特性研究[J]. 汪銘書,程安春,陳孝躍,劉兆宇,方鵬飛,郭宇飛.  中國獸醫(yī)雜志. 2002(12)
[9]血清5型鴨疫里氏桿菌在我國的發(fā)現(xiàn)及其病原特性研究[J]. 汪銘書,程安春,陳孝躍,劉兆宇,方鵬飛,郭宇飛.  中國獸醫(yī)科技. 2002(09)
[10]15型鴨疫里氏桿菌分離株的鑒定[J]. 張大丙,郭玉璞.  中國獸醫(yī)雜志. 2002(03)

博士論文
[1]鴨疫里默氏桿菌致病相關(guān)因子研究[D]. 李繼祥.西南大學(xué) 2009



本文編號：3036908