豬丹毒絲菌為革蘭氏陽(yáng)性無(wú)芽孢桿菌,主要對(duì)豬有致病作用,引起的疾病稱為豬丹毒。本實(shí)驗(yàn)以豬丹毒絲菌為研究對(duì)象,應(yīng)用噬菌體展示技術(shù)對(duì)其抗原表位和表面分子結(jié)合肽（SMBP）進(jìn)行研究,主要實(shí)驗(yàn)如下：通過菌體抗原吸附和重組葡萄球菌蛋白A （SPA）親和層析組合方法,從豬血清中純化豬丹毒絲菌特異性多克隆抗體,應(yīng)用噬菌體展示技術(shù),從隨機(jī)12肽庫(kù)中篩選豬丹毒絲菌的模擬抗原表位。經(jīng)過不同形式的三輪篩選,隨機(jī)挑取224個(gè)噬菌體測(cè)序,總共獲得36個(gè)模擬表位。同時(shí)以豬丹毒絲菌全菌作為靶分子,同樣用噬菌體12肽庫(kù)進(jìn)行三輪不同形式的篩選,隨機(jī)挑取144個(gè)噬菌體測(cè)序,獲得66個(gè)豬丹毒表面分子結(jié)合肽（SMBP）。篩選的模擬表位通過間接ELISA方法驗(yàn)證有11個(gè)呈陽(yáng)性,其中有三個(gè)與BSA（牛血清白蛋白）反應(yīng)較高。免疫印跡分析這11個(gè)模擬表位,表位15（GPKSNNVGVTYS）具有反應(yīng)原性。根據(jù)分子識(shí)別的反義肽理論,配體的反義肽應(yīng)該與該配體相對(duì)應(yīng)的受體具有同源性關(guān)系,反之亦然。本次實(shí)驗(yàn)篩選的36個(gè)豬丹毒模擬抗原表位有27個(gè)的反義肽（其中有9個(gè)是ELISA驗(yàn)證為陽(yáng)性的表位）與其相對(duì)應(yīng)的SMBP有同源性關(guān)系,雖然同源性不高,... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
目錄
第一章 文獻(xiàn)綜述
    第一節(jié) 豬丹毒絲菌的研究概況
    第二節(jié) 噬菌體展示技術(shù)用于抗原表位的篩選
    第三節(jié) 研究的目的與意義
第二章 豬丹毒絲菌多克隆抗體的制備
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 陽(yáng)性血清的選擇
            1.2.2 菌體抗原吸附法純化特異性抗體
            1.2.3 血清與細(xì)菌的用量
            1.2.4 血清稀釋對(duì)抗原吸附純化效果的影響
            1.2.5 吸附的飽和時(shí)間
            1.2.6 洗脫的效果
            1.2.7 血清的再次吸附
            1.2.8 SPA親和層析及純化IgG的純度、效價(jià)和濃度的檢測(cè)
    2 結(jié)果和分析
        2.1 豬血清的選擇
        2.2 豬丹毒絲菌特異性抗體的菌體抗原吸附純化
        2.3 血清和細(xì)菌的用量
        2.4 血清稀釋后的吸附純化的結(jié)果
        2.5 吸附和洗脫時(shí)間
        2.6 血清再次特異性純化的結(jié)果
        2.7 SPA親和層析后IgG的純度、效價(jià)和濃度
    3 討論
第三章 噬菌體展示技術(shù)篩選豬丹毒絲菌模擬抗原表位
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑和材料
        1.2 方法
            1.2.1 豬丹毒模擬抗原表位的噬菌體篩選
            1.2.2 測(cè)序及序列分析
            1.2.3 噬菌體的ELISA分析
            1.2.4 噬菌體的免疫印跡分析
    2 結(jié)果和分析
        2.1 篩選結(jié)果
        2.2 噬菌體測(cè)序和序列分析
        2.3 模擬表位的ELISA驗(yàn)證
        2.4 免疫印跡分析
    3 討論
第四章 噬菌體展示技術(shù)篩選豬丹毒絲菌表面分子結(jié)合肽
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑和材料
        1.2 方法
            1.2.1 豬丹毒絲菌表面分子結(jié)合肽（SMBP）的噬菌體篩選
            1.2.2 豬丹毒絲菌SMBP的初步驗(yàn)證
            1.2.3 豬丹毒絲菌SMBP與2型和7型豬鏈球菌的相關(guān)性分析
    2 結(jié)果和分析
        2.1 豬丹毒絲菌SMBP的篩選
        2.2 SMBP的ELISA驗(yàn)證
        2.3 2型和7型豬鏈球菌檢測(cè)豬丹毒SMBP
    3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
符號(hào)說明
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
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