幼畜體外胚胎生產和移植技術（juvenile in vitro embryo transfer, JIVET）是一項集幼畜超數排卵、卵母細胞體外成熟、體外受精、胚胎體外培養(yǎng)及胚胎移植為一體的技術。JIVET技術能夠大大地縮短家畜繁殖的世代間隔,充分發(fā)掘優(yōu)良母畜的繁殖潛能,提高畜群的遺傳改良速度與生產效率,為家畜育種提供豐富的遺傳資源。體外受精技術是JIVET技術的一個重要環(huán)節(jié),通過提高體外受精培養(yǎng)效果,能顯著提高后期胚胎的生長及發(fā)育質量,有效地提高JIVET技術的生產效率。本研究以新西蘭幼齡兔為主要研究對象,經幼齡兔超數排卵和卵母細胞體外成熟,對體外培養(yǎng)成熟的卵母細胞進行體外受精。在受精培養(yǎng)體系中添加不同濃度EGCG（0、5、10、15、20、25μM）,以研究抗氧化劑EGCG對精子獲能及幼齡兔卵母細胞受精的影響,并且與受精液添加相同濃度EGCG的成年兔體外受精效果進行對比研究,旨在建立一種高效的培養(yǎng)體系,改善幼齡兔卵母細胞體外受精培養(yǎng)效果。并運用實時熒光定量技術對OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在幼齡兔及成年兔體外受精生產胚胎中的相對表達量進行研究,從分子水平研究這兩類早期胚胎... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
目錄
符號說明
第一章 文獻綜述
    1 幼畜體外胚胎生產和移植技術
        1.1 幼畜超數排卵
        1.2 卵母細胞體外成熟
        1.3 體外受精
            1.3.1 精子體外獲能（In Vitro Capacitation）及機制
            1.3.2 受精
        1.4 體外胚胎培養(yǎng)
    2 表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）
        2.1 EGCG概述
        2.2 EGCG抗氧化作用
        2.3 EGCG在胚胎體外生產中的應用
    3 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因相關研究
        3.1 OCT-4基因
        3.2 GDF9基因
        3.3 Bcl2基因
    4 本次研究的目的與意義
    參考文獻
第二章 EGCG對新西蘭兔卵母細胞體外受精的影響
    1 試驗材料
        1.1 試驗動物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 器材的準備
            1.4.1 玻璃器皿的準備
            1.4.2 手術器械的準備
            1.4.3 橡膠塞的處理
        1.5 主要溶液配置
    2 試驗方法
        2.1 試驗安排
        2.2 試驗內容
            2.2.1 超數排卵處理方法
            2.2.2 卵母細胞獲取
            2.2.3 卵母細胞體外成熟
            2.2.4 卵母細胞體外受精
            2.2.5 精子獲能評價
        2.3 數據分析
    3 試驗結果
        3.1 添加不同濃度EGCG對精子獲能后頂體反應的影響
        3.2 不同濃度EGCG對幼齡兔卵母細胞體外受精的影響
        3.3 不同濃度EGCG對成兔卵母細胞體外受精的影響
        3.4 幼齡兔與成年兔卵母細胞體外受精效果比較
    4 分析與討論
        4.1 EGCG對精子獲能的影響
        4.2 EGCG在體外受精中的作用
        4.3 幼齡兔與成年兔卵母細胞體外受精效果比較
    參考文獻
第三章 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在新西蘭成年和幼齡兔胚胎中的差異表達研究
    1 試驗材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗試劑
        1.3 試驗儀器
        1.4 溶液配制
    2 試驗方法
        2.1 胚胎選擇
        2.2 總RNA提取
        2.3 反轉錄
        2.4 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因PCR擴增
        2.5 實時熒光定量PCR
        2.6 統(tǒng)計分析
    3 結果與分析
        3.1 總RNA的檢測
        3.2 目的基因的擴增
        3.3 實時熒光定量PCR產物的特異性檢測
        3.4 基因擴增效率一致性的判定
        3.5 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在幼齡和成年兔胚胎中相對表達變化
    4 討論
        4.1 OCT-4基因表達分析
        4.2 GDF-9基因表達分析
        4.3 Bcl-2基因表達分析
        4.4 幼齡兔與成年兔基因表達量差異分析
    參考文獻
結論
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文及獲得專利情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]羔羊卵母細胞體外胚胎生產影響因素分析[J]. 郭洪,萬鵬程,代蓉,石國慶.  湖北農業(yè)科學. 2013(19)
[2]影響羔(綿)羊超數排卵效果因素的研究[J]. 張效生,張金龍,崔茂盛,李義海,馮建忠.  中國草食動物科學. 2013(05)
[3]精子獲能時間及精卵共孵育時間對小鼠體外受精和胚胎發(fā)育的影響[J]. 段彪,杜海燕,張榮.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2013(07)
[4]犢牛超數排卵方法的研究[J]. 鄭自華,毛獻寶,陳寶劍,潘斌,黎江,范曉明,沈創(chuàng),韋英明.  中國畜牧獸醫(yī). 2012(07)
[5]羔羊超數排卵與胚胎體外生產技術研究進展[J]. 李運生,曹鴻國,劉亞,韓春楊,陶勇,張運海.  動物醫(yī)學進展. 2011(11)
[6]Oct4基因的研究進展[J]. 鄭鵬生,曹浩哲.  西安交通大學學報(醫(yī)學版). 2010(05)
[7]溫度對藍狐精子獲能的影響[J]. 于翠平,白玉妍,郭婷婷,劉志平.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2010(11)
[8]母源基因Gdf9、Zar1、Mater和Dnmt1 mRNA在綿羊卵母細胞和早期胚胎中的表達[J]. 侯敏,林嘉鵬,白潔,趙云程,汪立琴,陳世彬,葉小芳,黃俊成.  中國草食動物. 2010(02)
[9]哺乳動物的精子獲能及其鑒定[J]. 張士芳.  黑龍江動物繁殖. 2010(02)
[10]異源Oct-4基因啟動子在豬、兔和小鼠早期胚胎中的時空表達活性[J]. 張穎,史芳瑜,高紹榮,林愛星.  生物化學與生物物理進展. 2009(09)

碩士論文
[1]生長分化因子9對豬卵母細胞體外成熟及早期胚胎發(fā)育的影響及機制研究[D]. 李燕.南京師范大學 2013
[2]幼齡新西蘭兔超數排卵及其不同日齡FSHR基因表達量變化的研究[D]. 鄒恒.揚州大學 2010
[3]表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）對昆明小鼠新鮮/凍融精子體外受精胚胎發(fā)育的影響[D]. 劉婉敏.汕頭大學 2009
[4]兔GDF9的克隆與在性腺中的定位及表達豐度研究[D]. 季金強.揚州大學 2008
[5]小鼠體外受精胚與體內胚Oct4基因啟動子區(qū)DNA甲基化差異的研究[D]. 儲成風.安徽農業(yè)大學 2007
[6]不同添加物對牛卵母細胞體外成熟、體外受精及受精卵體外培養(yǎng)的影響[D]. 王紅玲.南京農業(yè)大學 2005



本文編號：3036440