本文關(guān)鍵詞：抗禽H9N2流感病毒樹突狀細(xì)胞靶向重組乳酸菌的構(gòu)建及其免疫效果評(píng)價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究利用乳酸菌作為黏膜疫苗遞呈載體的諸多優(yōu)勢(shì),構(gòu)建了特異性靶向樹突狀細(xì)胞的抗H9N2禽流感病毒的重組乳酸菌,并研究了該重組乳酸菌對(duì)小腸上皮細(xì)胞的黏附能力以及評(píng)價(jià)了其對(duì)小鼠的免疫效果。本研究首先對(duì)HA-GCN4-DCpep基因序列進(jìn)行密碼子優(yōu)化,之后將其連接到穿梭表達(dá)載體p SSIP409上,構(gòu)建重組表達(dá)載體p SSIP409-HA-GCN4-DCpep。該重組載體隨后經(jīng)過電轉(zhuǎn)化途徑導(dǎo)入乳酸菌NC8內(nèi),構(gòu)建出L.p-HA-GCN4-DCpep重組乳酸菌。通過質(zhì)粒雙酶切和western blot實(shí)驗(yàn)證實(shí),該重組乳酸菌構(gòu)建正確并且能夠正確表達(dá)出具有反應(yīng)原性的H9N2禽流感病毒的HA蛋白。L.p-HA-GCN4-DCpep重組乳酸菌按照免疫程序免疫BALB/c小鼠,研究其對(duì)腸上皮細(xì)胞的黏附能力。本實(shí)驗(yàn)分別在免疫的不同時(shí)間點(diǎn),收集小鼠腸段勻漿液,10倍倍比稀釋后進(jìn)行涂板計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示,重組乳酸菌能夠在小鼠空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸內(nèi)黏附并定植。免疫攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,L.p-HA-GCN4-DCpep重組乳酸菌免疫小鼠后能夠誘導(dǎo)較好的黏膜免疫應(yīng)答,誘導(dǎo)脾、PP結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)中CD3+CD4+和CD3+CD8+T增殖,引起腸道和肺泡內(nèi)特異性s Ig A的分泌以及血清中特異性Ig G和多種細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-12、IL-6、IL-10)的表達(dá)。與L.p對(duì)照組相比,L.p-HA-GCN4-DCpep組小鼠攻毒后的體重下降程度最輕,而且s Ig A和Ig G抗體水平明顯高于對(duì)照組。上述研究結(jié)果表明,L.p-HA-GCN4-DCpep重組乳酸菌具有良好的免疫原性,可以抵抗H9N2禽流感病毒的感染,其中HA的修飾標(biāo)簽—樹突狀細(xì)胞靶向肽(DCpep)在乳酸菌誘導(dǎo)黏膜免疫應(yīng)答中發(fā)揮了重要作用。本研究為進(jìn)一步探討重組乳酸菌在激發(fā)黏膜免疫反應(yīng)過程中,樹突狀細(xì)胞調(diào)控黏膜免疫應(yīng)答的機(jī)制及研制抗禽流感口服疫苗奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：H9N2禽流感病毒 重組乳酸菌 DCpep 黏附 黏膜免疫
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65
【目錄】：

• 內(nèi)容提要4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 引言11-12
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述 乳酸菌在黏膜免疫遞呈系統(tǒng)中的研究進(jìn)展12-19
• 一、LAB疫苗的研究及應(yīng)用13-16
• 二、影響LAB疫苗免疫原性的因素16-17
• 三、增強(qiáng)LAB疫苗黏膜免疫應(yīng)答的策略17-18
• 四、結(jié)語18-19
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容19-45
• 第一章 抗H9N2禽流感病毒DC靶向重組乳酸菌的構(gòu)建19-29
• 1.1 材料19-21
• 1.2 方法21-25
• 1.3 結(jié)果25-28
• 1.4 討論28
• 1.5 小結(jié)28-29
• 第二章 重組乳酸菌對(duì)腸上皮細(xì)胞的黏附能力研究29-33
• 2.1 材料29
• 2.2 方法29-31
• 2.3 結(jié)果31-32
• 2.4 討論32
• 2.5 小結(jié)32-33
• 第三章 重組乳酸菌的黏膜免疫效果評(píng)價(jià)33-45
• 3.1 材料33-34
• 3.2 方法34-37
• 3.3 結(jié)果37-42
• 3.4 討論42-44
• 3.5 小結(jié)44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-59
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介59-60
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果60-61
• 致謝61

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃蓉;梁威;劉紀(jì)園;王愛榮;柴同杰;;H9N2亞型禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析及其對(duì)小鼠致病力的研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年03期

2 李春紅;董玉龍;;H9N2亞型禽流感病毒血凝素基因的克隆及原核表達(dá)[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年18期

3 桑曉宇;高玉偉;李林;丁潔;朱曉文;張釗偉;于志君;張坤;程凱慧;馮娜;劉紅;王鐵成;楊松濤;黃耕;夏咸柱;;5株H9N2亞型禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析和豚鼠間傳播能力的評(píng)估[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2012年02期

4 張瑞華,金梅林,王貴華,趙思婷,喻正軍,陳煥春;鴨源H9N2亞型禽流感病毒血凝素基因的克隆、序列分析及原核表達(dá)[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版);2004年06期

5 黃艷艷;徐棟;胡北俠;文心田;張秀美;;四株H9N2亞型禽流感病毒血凝素基因的克隆與分子特征分析[J];浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2009年01期

6 劉彥云;劉春國(guó);王壽山;張超林;王偉;呂讓;劉明;;10株H9N2亞型禽流感病毒血凝素基因的序列分析[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年08期

7 郭霄峰,廖明,辛朝安;H9N2亞型禽流感病毒纖突蛋白基因的分析[J];中國(guó)人獸共患病雜志;2002年04期

8 張泉鵬;李作生;張富強(qiáng);李靜;趙煥云;張文東;宋建領(lǐng);鮑曉偉;邱薇;鄭穎;范泉水;;2006-2007年云南流行H9N2禽流感病毒血凝素全基因序列分析[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年03期

9 劉紅旗,彭大新,程堅(jiān),賈立軍,張如寬,劉秀梵;H9N2亞型禽流感病毒血凝素基因的遺傳變異[J];揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào);2002年02期

10 郭元吉,董婕,王敏,張燁,郭俊峰,吳昆昱;甲型流感病毒H9N2亞型毒株血凝素基因特性的研究[J];Chinese Medical Journal;2001年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張繼榮;姚青;;2007～2011年H9N2亞型禽流感病毒血凝素分子進(jìn)化分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

2 黃艷艷;徐棟;胡北俠;張秀美;路希山;;分離自中國(guó)北方的四株H9N2亞型禽流感病毒血凝素基因的分子進(jìn)化分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)成立大會(huì)暨第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 鄭靈巧;H9N2禽流感能直接感染人類[N];健康報(bào);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 陳瑞玲;抗禽H9N2流感病毒樹突狀細(xì)胞靶向重組乳酸菌的構(gòu)建及其免疫效果評(píng)價(jià)[D];吉林大學(xué);2016年

2 陳雨昕;H9N2亞型禽流感病毒與雞傳染性支氣管炎病毒的協(xié)同致病作用[D];揚(yáng)州大學(xué);2014年

3 楊燕;NA蛋白氨基酸位點(diǎn)突變對(duì)H9N2亞型AIV傳播特性和致病力的影響[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：抗禽H9N2流感病毒樹突狀細(xì)胞靶向重組乳酸菌的構(gòu)建及其免疫效果評(píng)價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：301819