【目的】克隆沙蔥螢葉甲Galerucadaurica保幼激素結(jié)合蛋白基因（Juvenilehormonebinding protein,JHBP）cDNA全長序列,分析其分子特征和表達(dá)特性,為進(jìn)一步明確其在沙蔥螢葉甲生長發(fā)育及滯育中的作用奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā炕诒緦�(shí)驗(yàn)室組裝的沙蔥螢葉甲轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,采用RACE技術(shù),克隆沙蔥螢葉甲GdJHBP基因cDNA全長序列;運(yùn)用ORF Finder、SignaIP、DNAMAN和TMHMM等軟件分析其分子特征;利用MEGA6.0軟件中的鄰接法（Neighbor-joining,NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹;應(yīng)用熒光實(shí)時定量PCR（RT-qPCR）技術(shù)分析GdJHBP在沙蔥螢葉甲不同發(fā)育時期、成蟲不同組織及高溫脅迫下的表達(dá)模式�！窘Y(jié)果】克隆獲得了沙蔥螢葉甲保幼激素結(jié)合蛋白基因GdJHBP cDNA全長序列（GenBank登錄號:MG460309）,cDNA全長為826 bp,開放閱讀框（ORF）為714 bp,編碼237個氨基酸;蛋白質(zhì)預(yù)測分子量為26.58ku,等電點(diǎn)為4.37;包含1條信號肽,無跨膜區(qū),且在第27-189位氨基酸之間存在一個保幼激素結(jié)合蛋... 

【文章來源】：應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2020,57(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

沙蔥螢葉甲GdJHBP中間片段（A）、5?RACE目的片段（B）和3?RACE目的片段（C)PCR擴(kuò)增電泳圖

RT-qPCR分析表明，GdJHBP在沙蔥螢葉甲不同發(fā)育階段均有表達(dá)，且存在顯著差異（P<0.05）（圖4）。其中，在1齡和2齡幼蟲中表達(dá)量最高，其次為3齡幼蟲，在卵和蛹中的表達(dá)量最低；在成蟲期，GdJHBP表達(dá)量在滯育前（羽化3 d）較高，進(jìn)入滯育（羽化7 d）以后，表達(dá)量顯著下降并維持在較低的水平，羽化40 d以后隨著成蟲發(fā)育，表達(dá)量又逐漸升高，滯育解除（羽化后100 d）后，表達(dá)量顯著上升，但遠(yuǎn)低于幼蟲期的表達(dá)量。GdJHBP在沙蔥螢葉甲成蟲頭、胸和腹部均有表達(dá)，但在胸和腹部的表達(dá)量遠(yuǎn)高于頭部（圖5）。圖3 沙蔥螢葉甲GdJHBP與其它昆蟲JHBP基因的氨基酸序列比對

圖2 沙蔥螢葉甲GdJHBP基因的核苷酸及推導(dǎo)的編碼氨基酸序列（A）及序列包含的保守功能域（B)圖4 沙蔥螢葉甲與其它昆蟲保幼激素結(jié)合蛋白氨基酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]家蠶保幼激素結(jié)合蛋白Bmtol基因的克隆及功能分析[J]. 何石寶,殷婭茹,鄭茜,郭東東,辛佳,朱勇.  生物工程學(xué)報. 2018(01)
[2]家蠶保幼激素結(jié)合蛋白Bmtol基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 何石寶,楊成飛,尚杉,王凌燕,唐文超,朱勇.  中國生物工程雜志. 2017(10)
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本文編號：3016936