發(fā)布時間：2021-02-02 10:58

　　為建立犬呼吸道冠狀病毒（Canine respiratory coronavirus,CRCoV）、犬細小病毒（Canine parvovirus,CPV）、犬瘟熱病毒（Canine distemper virus,CDV）3種病毒的多重PCR方法,根據(jù)GenBank中CRCoV、CPV和CDV的基因序列,進行BLAST同源性分析,找出保守序列,并根據(jù)保守序列對每個病毒設計引物,建立擴增3種病毒的多重PCR方法,并通過已建立的方法對收集的呼吸道病犬病料進行檢測。結果表明,所建立的三重PCR體系組成為2×Taq Mix 12.5μL,3對上、下游引物各0.6μL,混合模板1μL,ddH₂O 7.9μL;擴增程序為94℃5 min;94℃30 s,54℃1 min,72℃24 s,共35個循環(huán);72℃8 min。該方法具有較高的靈敏性和特異性。臨床驗證實驗表明,本實驗所建立的多重PCR方法可用于臨床診斷。 

【文章來源】：上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2020,(06)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

三重PCR的檢測結果

單個病毒的PCR檢測結果顯示:CPV的PCR檢測(圖1),46～54 ℃均能獲得清晰的條帶;CDV的PCR檢測(圖2),52、54 ℃能獲得清晰的條帶;CRCoV的PCR檢測(圖3),54 ℃能顯示出清晰的條帶。綜合3個單病毒擴增檢測結果,選擇54 ℃為多重PCR退火溫度。圖2 不同退火溫度的CDV PCR檢測結果

不同退火溫度的CDV PCR檢測結果

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3014582