發(fā)布時間：2021-01-31 15:22

　　豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）感染豬而引起的一種急性腸道傳染病,常導(dǎo)致病豬水樣腹瀉、嘔吐、脫水。自2010年起,其大規(guī)模的爆發(fā)給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PEDV屬冠狀病毒科α冠狀病毒屬,其基因組為單股正鏈RNA,編碼非結(jié)構(gòu)蛋白1A/1B和結(jié)構(gòu)蛋白S、E、M、N。Orf3是位于PEDV s基因和e基因之間的第三閱讀框,是目前發(fā)現(xiàn)的PEDV的唯一一個附屬基因,編碼ORF3蛋白,有關(guān)其功能是PEDV的研究熱點(diǎn)之一。獸醫(yī)界普遍認(rèn)為其與PEDV的毒力相關(guān),但在現(xiàn)有的研究中,受研究手段的限制,對其生物學(xué)作用和機(jī)理還了解不多。本研究的研究內(nèi)容及結(jié)果如下:（1）3株重組病毒的拯救及鑒定。通過構(gòu)建帶有不同orf3基因及orf3基因缺失的重組質(zhì)粒,利用基于RNA同源重組的PEDV反向遺傳學(xué)操作系統(tǒng)拯救3株攜帶有不同orf3基因及orf3基因缺失的重組PEDV,終末稀釋法純化病毒,并經(jīng)RT-PCR法和免疫組化對獲得的重組病毒進(jìn)行鑒定。RT-PCR結(jié)果及細(xì)胞病變觀察證明... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

豬感染PEDV后剖檢觀察圖

圖 1-2 PEDV 病毒粒子形態(tài)結(jié)構(gòu)示意圖A. PEDV 結(jié)構(gòu)示意圖；B. PEDV 病毒粒子電鏡觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)圖Figure1-2 Schematic representation and electro-microscopic view of PEDV virusA. Schematic structure of PEDV; B. PEDV particles Observed through Electron microscope對于 PEDV 傳代細(xì)胞的培養(yǎng)，國內(nèi)外學(xué)者雖然探索多年但一直沒有突破性進(jìn)展，這在很大程度上制約了 PEDV 的相關(guān)研究。直到 1988 年，瑞士學(xué)者 Hofmann等通過在 Vero 細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入胰酶培養(yǎng)，成功的觀察到細(xì)胞病變，并檢測到PEDV[25]。胰酶對于 PEDV 的增殖到底有什么作用呢？有研究報(bào)告證實(shí)，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，外源性胰酶有助于 PEDV 從感染的細(xì)胞表面向周圍細(xì)胞擴(kuò)散，在病毒釋放過程中發(fā)揮重要的作用[26]。1.2.3 PEDV 的理化特性PEDV 在 4℃，PH 5.0~9.0 及 37℃條件下較為穩(wěn)定。在 60℃環(huán)境下 30min 可使其失活。PEDV 對乙醚和氯仿敏感，在蔗糖中的密度為 1.18g/mL。有研究表明，正常情況下 PEDV 不能凝集豬、家兔、小鼠、人、牛、羊、雞的紅細(xì)胞，但經(jīng)適當(dāng)濃度的胰酶作用下，在 37℃環(huán)境下，30min 后可以使兔子的紅細(xì)胞有效凝集，

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文1.2.5 PEDV 基因組的復(fù)制冠狀病毒的宿主范圍有限，僅感染特定的天然宿主，PEDV 也是如此。PEDVS 蛋白的 S1 結(jié)構(gòu)域的 N-端區(qū)域?qū)τ谧R別受體具有重要作用[30]。如圖 1-2 所示，PEDV 復(fù)制首先是 S 蛋白識別到受體豬氨肽酶 N（Porcine aminopeptidase N，pAPN）[31,32]并與之結(jié)合通過膜融合或胞飲方式將病毒導(dǎo)入靶細(xì)胞，隨后在細(xì)胞質(zhì)中開始基因組復(fù)制，最終以胞吐的形式釋放到細(xì)胞外。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3011130