無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）是導(dǎo)致奶牛乳房炎的主要病原菌之一,屬高度接觸性傳染的專性乳腺寄生菌,易引起隱性乳房炎,可導(dǎo)致持續(xù)性感染且很難自愈,給奶牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。無乳鏈球菌在人類醫(yī)學(xué)上稱B群鏈球菌（Group B Streptococci, GBS）,是一種對新生兒有生命威脅的常見菌,而如今人源和動物源無乳鏈球菌耐藥現(xiàn)象都很嚴(yán)重；研究發(fā)現(xiàn),無乳鏈球的部分毒力因子在其致病過程中發(fā)揮著重要作用。故本論文對3個奶牛場隱性乳房炎的致病菌進行了分離、鑒定和耐藥性分析,選擇無乳鏈球菌分離株的毒力因子BibA蛋白進行了體外表達和純化研究,旨在為無乳鏈球菌免疫學(xué)檢測方法的建立或無乳鏈球菌亞單位疫苗的研究提供技術(shù)資料。（1）利用16S rDNA序列分析方法結(jié)合細菌形態(tài)和生化特性分析,分離鑒定了3個奶牛場隱性乳房炎的主要致病菌,包括大腸桿菌、腸球菌、無乳鏈球和金黃色葡萄球菌等；對分離的無乳鏈球菌進行了血清型鑒定和耐藥性分析,結(jié)果顯示分離的無乳鏈球菌血清型為1a型,對青霉素、鏈霉素等常用抗生素耐藥,對紅霉素、四環(huán)素等抗生素較為敏感。（2）選擇分離于臨床的無乳鏈球菌... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 無乳鏈球菌與致病機制相關(guān)的毒力因子研究進展
        1.1.1 孔毒素
        1.1.2 促進免疫逃避的因子
        1.1.3 粘附因子
    1.2 本研究的目的和意義
第二章 奶牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定及無乳鏈球菌的耐藥性分析
    2.1 材料
        2.1.1 牛乳收集
        2.1.2 主要試劑及材料
        2.1.3 溶液的配制
        2.1.4 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 隱性乳房炎的檢測及牛乳的收集
        2.2.2 細菌的分離培養(yǎng)
        2.2.3 細菌的DNA提取
        2.2.4 細菌16SrDNA擴增
        2.2.5 無乳鏈球菌的血清型鑒定
        2.2.6 無乳鏈球菌的的藥物敏感性試驗
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 細菌的分離鑒定
        2.3.2 無乳鏈球菌的血清型鑒定
        2.3.3 無乳鏈球菌的藥物敏感性實驗
    2.4 討論
        2.4.1 細菌的分離鑒定
        2.4.2 無乳鏈球菌的耐藥試驗
第三章 無乳鏈球菌BIBA基因的克隆及序列分析
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 主要試劑及材料
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 引物設(shè)計與合成
        3.2.2 BibA基因的PCR擴增
        3.2.3 目的基因的克隆與鑒定
        3.2.4 BibA基因片段的生物信息學(xué)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 BibA基因的克隆與鑒定
        3.3.2 BibA基因的生物信息學(xué)分析
    3.4 討論
第四章 BIBA蛋白的表達與純化
    4.1 材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 主要試劑及材料
        4.1.3 試劑的配置
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
    4.2 方法
        4.2.1 表達載體的構(gòu)建
        4.2.2 工程菌的構(gòu)建
        4.2.3 BibA蛋白的誘導(dǎo)表達
        4.2.4 誘導(dǎo)條件的優(yōu)化
        4.2.5 蛋白的純化與復(fù)性
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 重組表達質(zhì)粒的鑒定
        4.3.2 BibA原核表達的可溶性分析
        4.3.3 目的蛋白的檢測
        4.3.4 表達條件的優(yōu)化
        4.3.5 蛋白的純化與復(fù)性
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]B群鏈球菌表面蛋白FbsA的提取及免疫原性初步探討[D]. 張學(xué)峰.北京生物制品研究所 2008



本文編號：3008907