近年來,干細胞治療在相關疾病中已經進入臨床試驗階段,但免疫排斥現(xiàn)象如影隨從,是干細胞治療技術的絆腳石。半乳糖凝集素1（Galectin-1,GAL-1）在大多數(shù)間充質干細胞、多數(shù)腫瘤及鹿茸干細胞中被發(fā)現(xiàn)高表達,而相應的這些細胞中均出現(xiàn)免疫抑制現(xiàn)象。GAL-1作為免疫調控因子,推測其很可能參與了干細胞的免疫調控。鹿茸是唯一能夠在失去后還能完全再生的哺乳動物器官。研究表明,鹿茸再生是一個基于干細胞的過程,鹿茸干細胞中高表達GAL-1基因,推測其是鹿茸再生中的一個重要調控因子。為研究GAL-1在鹿茸干細胞中的表達及可能的生物學功能,本論文以東北梅花鹿鹿茸的干細胞組織,即生茸區(qū)骨膜和角柄骨膜（致敏角柄骨膜與休眠角柄骨膜）以及對照組織面部骨膜為研究材料,克隆了梅花鹿的GAL-1基因CDS區(qū)序列,利用軟件或網站,對GAL-1蛋白進行生物信息學分析;利于Western-blot及Q-PCR技術檢測了GAL-1在鹿茸干細胞中的相對表達量。結果顯示:梅花鹿GAL-1 ORF全長為408bp,編碼134個氨基酸;相對分子質量為14.69KDa,氨基酸序列與牛羊高度接近（95%>）;主要定位于細胞外,... 

【文章來源】：中國農業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

GAL-1目的片段RT-PCR結果

圖2 GAL-1基因開放閱讀框及其核酸、氨基酸序列Fig 2 Open reading frame and the sequences of nucleotides and amino acids of GAL-12.2.2 梅花鹿 GAL-1 CDS 區(qū)相似度對比與發(fā)育樹分析將牛、人、綿羊、大鼠、小鼠、野豬、犬科、獼猴、大鯢、條石鯛、灰蓋鬼傘菌的GAL-1核苷酸與氨基酸序列導入DNAman，與梅花鹿GAL-1序列對比發(fā)現(xiàn)相似度分別為：34.58％~95.59％，17.88％~97.06％，。與同屬的反芻類動物相似度最高，與哺乳動物相似度接近，與大鯢、條石鯛、灰蓋鬼傘菌的相似度逐漸降低，這符合進化規(guī)律。表 2 梅花鹿GAL-1核苷酸與氨基酸序列與其他動物的一致性分析Table 2 Comparisons of nucleotides and amino acids of sika deer with those from other organisms物種Species核苷酸一致性/％Nucleotides identity氨基酸一致性/％Amino acid identity牛 Bos taurus綿羊 Ovis aries獼猴 Macaca mulatta95.5995.1388.7395.3097.0689.63

圖 3 GAL-1 基因編碼區(qū)的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 3 Phylogenetic tree for GAL-1 gene coding region2.2.3 Gal 基因編碼的蛋白質結構分析2.2.3.1 理化性質GAL-1基因編碼蛋白是一個約為14Kda的小分子蛋白，在幾乎所有真核生物中均有表達，進化比較保守。ProtParam（http://web.expasy.org/protparam/）分析顯示：GAL-1分子量為14.69Kd等電點（PI）為5.10。GAL-1蛋白的組成包含20種氨基酸，丙氨酸（Ala）占比最高（11.1％），色氨酸（Trp）與蛋氨酸（Met）占比最低（均為0.7％）。Protscale（http://web.expasy.org/protscale分析蛋白親疏水性顯示GAL-1蛋白僅在1-20和80-100存在兩個疏水性較高的區(qū)域，其它區(qū)域趨向于親水；ProtParam中親水性的平均值（GRAVY）-0.145<0；利用TMHMM Server v.2.0網站對GAL蛋白進行跨膜分析（http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/），顯示GAL-1蛋白沒有跨膜結構

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]利用qRT-PCR技術篩選鹿茸生長中心細胞與鹿茸干細胞內參基因[J]. 張偉,劉佳,董振,李春義.  農業(yè)生物技術學報. 2017(05)
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[9]c-myc ASODN對半乳糖誘導的晶狀體上皮細胞中cMyc蛋白表達及細胞周期的影響[J]. 范芳,葛正龍,李長福,曾小平,李海祥.  第四軍醫(yī)大學學報. 2004(11)
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碩士論文
[1]Galectin-1在滋養(yǎng)層干細胞增殖和分化中的表達與相關調控分子的研究[D]. 尤佳莉.浙江大學 2015
[2]梅花鹿生茸區(qū)骨膜干細胞Galectin-1基因RNAi重組慢病毒載體的構建[D]. 秦欣欣.江蘇科技大學 2013
[3]Galectin-1的表達純化及其抑瘤功能的初步研究[D]. 任聲權.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院 2008



本文編號：3007620