雞傳染性支氣管炎（IB）是由雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）引起的一種急性、高度接觸傳染性疾病,是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要傳染病之一。其血清型眾多,且不同血清型之間的交叉反應(yīng)小甚至不存在交叉反應(yīng),而且現(xiàn)有的商品化疫苗對(duì)流行毒株無(wú)法提供有效的免疫保護(hù)作用,使得IB在免疫雞群仍不斷流行傳播。因此,在本地區(qū)流行毒株當(dāng)中培育弱毒疫苗,對(duì)防治IB的發(fā)生和流行有重要的意義。Sczy3為本實(shí)驗(yàn)室2009年分離的一株LX4型IBV毒株,將其在非免疫雞胚連續(xù)傳至100代（P100）以致弱,希望制備出一株致病力減弱但具有良好免疫原性的IB疫苗株。試驗(yàn)結(jié)果顯示：毒株在雞胚傳代過(guò)程中,病毒滴度逐漸升高,接種雞胚出現(xiàn)典型病變,毒株能夠高度適應(yīng)雞胚；與之相反,取不同代次毒進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn),結(jié)果顯示該毒株對(duì)非免疫雛雞的致病力隨著雞胚傳代次數(shù)的增加會(huì)逐漸降低。P100代毒接種雞群后,未出現(xiàn)臨床發(fā)病癥狀,發(fā)病率和死亡率均為0%,說(shuō)明Sczy3毒株在雞胚連續(xù)傳至P100代時(shí)已充分致弱。為了觀察四川地區(qū)近年來(lái)IBV的流行特點(diǎn),本試驗(yàn)在2012-2013年期間對(duì)四川部分地區(qū)IBV進(jìn)行了分離鑒定,共分離鑒定出10株IBV野毒株。對(duì)毒株S1基... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞對(duì)照表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 概論
        1.1 發(fā)生史
        1.2 病原學(xué)
            1.2.1 病原分類
            1.2.2 化學(xué)組成
            1.2.3 理化特性
            1.2.4 生物學(xué)特性
            1.2.5 病毒分型方法
        1.3 基因組結(jié)構(gòu)
        1.4 結(jié)構(gòu)蛋白
            1.4.1 N蛋白
            1.4.2 S蛋白
            1.4.3 M蛋白
            1.4.4 E蛋白
        1.5 臨床癥狀
        1.6 病理變化
        1.7 病毒的分離和鑒定
            1.7.1 病毒的分離
            1.7.2 病毒的鑒定
        1.8 流行特征
            1.8.1 不斷地出現(xiàn)新的變異株
            1.8.2 易感動(dòng)物和宿主范圍
            1.8.3 傳播方式
            1.8.4 不同致病型毒株的發(fā)病特征
            1.8.5 并發(fā)和繼發(fā)感染
    2 IB疫苗的研究進(jìn)展
        2.1 IB滅活苗
        2.2 IB弱毒疫苗
        2.3 IB基因工程疫苗
            2.3.1 IB基因工程亞單位疫苗
            2.3.2 IB核酸疫苗
            2.3.3 IB重組疫苗
            2.3.4 IB轉(zhuǎn)基因疫苗
    3 試驗(yàn)?zāi)康募耙饬x
第二部分 試驗(yàn)內(nèi)容
    第一章 IBV分離株SCZY3的雞胚傳代致弱
        1 材料
            1.1 試驗(yàn)動(dòng)物、雞胚和雞紅細(xì)胞
            1.2 毒株與菌株
            1.3 主要儀器
            1.4 主要試劑和試劑盒
            1.5 試劑的配制
            1.6 引物的設(shè)計(jì)
        2 方法
            2.1 雞胚傳代
            2.2 雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)
            2.3 RT-PCR鑒定
                2.3.1 病毒總RNA的提取
                2.3.2 RT-PCR
            2.4 SCZY3不同代次毒的致弱評(píng)價(jià)
                2.4.1 病毒滴度測(cè)定
                2.4.2 SCZY3不同代次毒的致弱評(píng)價(jià)
        3 結(jié)果
            3.1 雞胚傳代
            3.2 尿囊液對(duì)雞紅細(xì)胞的凝集活性
            3.3 RT-PCR鑒定結(jié)果
            3.4 SCZY3不同代次毒的致弱評(píng)價(jià)
                3.4.1 病毒滴度的測(cè)定
                3.4.2 SCZY3不同代次毒的致病力
        4 討論
    第二章 2012-2013年四川部分地區(qū)IBV的流行病學(xué)調(diào)查
        1 材料
            1.1 病料
            1.2 主要生化試劑
            1.3 試劑的配制
            1.4 引物的設(shè)計(jì)
        2 方法
            2.1 病毒的分離與鑒定
                2.1.1 病毒的分離
                2.1.2 病毒鑒定
            2.2 IBV分離株S1基因序列的測(cè)定
                2.2.1 病毒RNA提取
                2.2.2 RT-PCR擴(kuò)增
                2.2.3 S1基因的TA克隆
                2.2.4 轉(zhuǎn)化
                2.2.5 重組質(zhì)粒的篩選和鑒定
            2.3 S1基因系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)分析
        3 結(jié)果
            3.1 病毒的分離與鑒定
                3.1.1 病毒的分離
                3.1.2 病毒的鑒定
            3.2 S1基因克隆測(cè)序結(jié)果
            3.3 IBV分離株S1基因序列的測(cè)定及基因型分析
        4 討論
    第三章 SCZY3 P100免疫保護(hù)效力的評(píng)價(jià)
        1 材料
            1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 毒株
            1.3 常用試劑
            1.4 試劑配制
        2 方法
50的測(cè)定">            2.1 EID₅₀的測(cè)定
            2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.3 樣品采集
            2.4 樣品病毒分離
            2.5 間接ELISA檢測(cè)抗體
            2.6 病理切片的制備
        3 結(jié)果
50的測(cè)定">            3.1 EID₅₀的測(cè)定
            3.2 SCZY3 P100免疫保護(hù)效力的評(píng)價(jià)
                3.2.1 發(fā)病雞臨診癥狀、發(fā)病率及死亡率
                3.2.2 血清抗體變化及病毒分離結(jié)果
                3.2.3 攻毒后組織病理學(xué)變化
        4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號(hào)：3004626