Six1是SIX轉錄因子家族（Sine oculis homeobox family, SIX）中重要的成員,在肌肉發(fā)生、生肌節(jié)形成及肌纖維類型分化等過程中起著重要作用。另外,Six1與其協(xié)同因子Eya2能直接上調mTOR的表達,誘導蛋白質的合成代謝增強,引起心肌生理性肥大,表明Six1在肌肉蛋白質合成代謝過程中也發(fā)揮著重要的作用。但目前關于Six1與肌肉蛋白質代謝的具體調控機制還未見報道。本研究通過鴨成肌細胞轉染真核表達載體pEGFP-duSix1,分析過表達Six1基因對細胞增殖活性及細胞蛋白質代謝的影響。同時為深入探討Six1是否對蛋白質合成的相關基因PI3K、mTOR具有調控作用,采用其特異性抑制劑LY294002、雷帕霉素處理鴨成肌細胞,再過表達Six1基因,探討Six1基因在細胞蛋白代謝過程中可能存在的具體調控途徑。結果表明：1、利用真核表達載體pEGFP-duSix1轉染鴨成肌細胞,發(fā)現(xiàn)Six1基因的mRNA表達量極顯著高于對照組（P<0.01）,細胞增殖活性明顯上升（P<0.05）,同時mTOR、S6K1的mRNA表達水平顯著上調（P<0.05）。We... 

【文章來源】：四川農業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用詞語英文縮寫
前言
1 文獻綜述
    1.1 Six1基因在肌肉發(fā)育的功能研究
    1.2 調節(jié)肌肉蛋白質代謝信號通路
        1.2.1 蛋白質合成主要信號通路（PI3K/Akt/mTOR）
        1.2.2 蛋白質降解主要信號通路
    1.3 RNA/Protein比值與細胞蛋白合成代謝的關系
    1.4 Six1參與調節(jié)肌細胞蛋白質代謝
    1.5 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗樣品
        2.1.2 藥品和試劑
    2.2 試驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 總RNA提取及質量檢測
        2.2.3 RNA的反轉錄反應
        2.2.4 引物設計及合成
        2.2.5 pEGFP-duSix1重組質粒的抽提及鑒定
        2.2.6 熒光定量PCR
        2.2.7 Western-blot
        2.2.8 RNA/protein比值
        2.2.9 試驗數(shù)據(jù)分析
3 結果與分析
    3.1 pEGFP-duSix1真核表達載體鑒定
    3.2 轉染pEGFP-duSix1對細胞蛋白代謝的影響
        3.2.1 轉染及轉染后鑒定結果
        3.2.2 轉染pEGFP-duSix1對細胞增殖活性的影響
        3.2.3 細胞轉染Six1對相關基因表達量的影響
        3.2.4 細胞轉染Six1對相關蛋白表達量的影響
        3.2.5 細胞轉染Six1對細胞總蛋白合成的影響
    3.3 LY294002處理及轉染pEGFP-duSix1對細胞蛋白代謝的影響
        3.3.1 LY294002處理后轉染pEGFP-duSix1對細胞增殖活性的影響
        3.3.2 LY294002處理后轉染pEGFP-duSix1對相關基因表達量的影響
        3.3.3 LY294002處理后轉染pEGFP-duSix1對相關蛋白表達量的影響
        3.3.4 LY294002處理后轉染pEGFP-duSix1對細胞總蛋白合成的影響
    3.4 Rapamycin處理細胞及轉染pEGFP-duSix1對細胞蛋白代謝的影響
        3.4.1 Rapamycin處理后轉染pEGFP-duSix1對細胞增殖活性的影響
        3.4.2 Rapamycin處理后轉染pEGFP-duSix1對相關基因表達量的影響
        3.4.3 Rapamycin處理后轉染pEGFP-duSix1對相關蛋白表達量的影響
        3.4.4 Rapamycin處理后轉染pEGFP-duSix1對細胞總蛋白合成的影響
4 討論
    4.1 Six1與蛋白合成相關基因的調控關系
    4.2 Six1與蛋白降解相關基因的調控關系
    4.3 LY294002處理對細胞蛋白代謝的影響
    4.4 Rapamycin處理對細胞蛋白代謝的影響
    4.5 Sixl可能通過調控mTOR影響細胞蛋白合成
5 結論
參考文獻
致謝
碩士研究生學習期間發(fā)表文章


【參考文獻】：
期刊論文
[1]運動與補充蛋白對骨骼肌產生的影響[J]. 韓萍,牛潔,張仁祥.  山西體育科技. 2009(04)
[2]Six1基因研究進展[J]. 鄭秀惠,李力.  國際腫瘤學雜志. 2009 (12)
[3]mTOR/p70s6k通路與運動誘導的肌肉蛋白質合成[J]. 關尚一,張少生,李秋利,盧健.  中國組織工程研究與臨床康復. 2009(24)
[4]流式細胞儀檢測細胞體積及RNA/DNA比值[J]. 劉棟,劉志紅.  腎臟病與透析腎移植雜志. 1999(03)



本文編號：3000959