豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea，PED）是引起豬以腹瀉、嘔吐和脫水為主要特征的腸道傳染病。不同年齡和不同品種的豬均易感，哺乳仔豬死亡率達(dá)95%以上。近年來(lái)，PED的流行區(qū)域有逐漸擴(kuò)大的趨勢(shì)，在世界各地廣泛傳播，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，PED的及時(shí)確診和防治研究具有重要的意義。本試驗(yàn)首先將經(jīng)RT-PCR鑒定為PEDV陽(yáng)性的腹瀉仔豬糞便，小腸及內(nèi)容物樣品，在Vero細(xì)胞上連續(xù)傳代，分離病毒，并通過(guò)穩(wěn)定的細(xì)胞病變、病毒的TCID50測(cè)定、RT-PCR擴(kuò)增試驗(yàn)、IPMA、間接ELISA試驗(yàn)等方法對(duì)該分離毒進(jìn)行了鑒定，并進(jìn)行連續(xù)傳代。試驗(yàn)結(jié)果表明：病毒盲傳22代，未出現(xiàn)明顯的病變，第23代48h出現(xiàn)可見(jiàn)CPE。為進(jìn)一步證明這種病變是由PEDV所引起的，本試驗(yàn)采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增PEDV S基因，結(jié)果為陽(yáng)性；單層過(guò)氧化物酶試驗(yàn)細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)彌漫狀棕色著染，說(shuō)明細(xì)胞感染PEDV；間接ELISA檢測(cè)，判斷此細(xì)胞培養(yǎng)毒為陽(yáng)性；對(duì)第23代病毒測(cè)定TCID50結(jié)果為10-2.5/0.05ml。由以上的試驗(yàn)可以證明從糞便里分離出的這株病毒為PEDV，此毒株的獲得為我國(guó)研... 

【文章來(lái)源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 引言
    1.1 PEDV 概述
    1.2 豬流行性腹瀉病毒的生物學(xué)特性研究
        1.2.1 PEDV 的形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.2.2 PEDV 的理化特性
    1.3 PEDV 基因組結(jié)構(gòu)及主要編碼的蛋白
        1.3.1 PEDV 的基因組結(jié)構(gòu)
        1.3.2 主要編碼的蛋白
    1.4 PEDV 的培養(yǎng)特性
    1.5 病毒感染的分子基礎(chǔ)與病毒感染特性的研究
    1.6 本試驗(yàn)研究的理論意義
2.材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 樣品
        2.1.2 細(xì)胞系
        2.1.3 菌株與載體
        2.1.4 試驗(yàn)中用到的引物
        2.1.5 抗體及血清
        2.1.6 主要試劑及配制
        2.1.7 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 樣品的采集
        2.2.2 樣品的處理
        2.2.3 病毒的分離培養(yǎng)
        2.2.4 分離病毒的鑒定
        2.2.5 pAPN 全基因的擴(kuò)增、克隆及鑒定
        2.2.6 pAPN-SPC 基因的 PCR 擴(kuò)增
        2.2.7 重組真核表達(dá)載體 pEGFP-pAPN-SPC 的構(gòu)建及提取
        2.2.8 重組真核表達(dá)載體 pEGFP-pAPN-SPC 的鑒定及序列測(cè)定
        2.2.9 G418 最佳工作濃度的確定
        2.2.10 重組真核表達(dá)載體 pEGFP-pAPN-SPC 轉(zhuǎn)染 Vero 細(xì)胞及篩選重組質(zhì)粒
        2.2.11 pAPN-SPC 在 Vero 細(xì)胞系中表達(dá)的檢測(cè)
        2.2.12 通過(guò)熒光定量 PCR 檢測(cè)構(gòu)建細(xì)胞對(duì) PEDV 的易感性
3 結(jié)果與分析
    3.1 結(jié)果
        3.1.1 分離病毒培養(yǎng)結(jié)果
        3.1.2 分離病毒鑒定結(jié)果
        3.1.3 pAPN-SPC-Vero 細(xì)胞系鑒定結(jié)果
    3.2 分析
        3.2.1 病毒的分離鑒定
        3.2.2 pAPN-Vero 細(xì)胞系的建立
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的論文
附錄
    附錄 A pAPN 基因測(cè)序結(jié)果
作者簡(jiǎn)歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[5]豬流行性腹瀉的實(shí)驗(yàn)室診斷方法研究進(jìn)展[J]. 劉濤,王瑞.  豬業(yè)科學(xué). 2010(12)
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