為了研制廉價高效的豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）亞單位疫苗,根據(jù)大腸桿菌密碼子的偏好性合成PCV2b（GenBank:AY969004.1）cap基因全序列,利用PCR技術(shù),分別將PCV2的2個B細(xì)胞表位(²²⁶LKDPPLNP²³³和¹⁹⁵HVGLGTAF²⁰²)以單獨和串聯(lián)的方式連接到Cap的C端,成功構(gòu)建至pE-SUMO表達(dá)載體,將3個重組載體轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株BL21（DE3）后誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)SDS-PAGE分析和Western Blotting鑒定,3種重組蛋白均以可溶形式表達(dá)且表達(dá)正確。對3種重組蛋白分別進(jìn)行鎳柱親和層析純化,再用SUMO蛋白酶除去融合標(biāo)簽,獲得無標(biāo)簽的Cap-e1、Cap-e2和Cap-e12蛋白,并分別與相應(yīng)的弗氏佐劑等體積乳化,將20只6周齡大小的雌性Balb/c小鼠隨機(jī)分成5組,分別免疫3種重組蛋白,同時設(shè)置疫苗組和PBS組作為對照組,并進(jìn)行免疫評價,比較C末端連接的不同B細(xì)胞表位對Cap免疫原性的影響。抗體檢測結(jié)果表明,除第2周外,各試驗組的抗體水平均顯著高于PBS組,且連... 

【文章來源】：華北農(nóng)學(xué)報. 2020,35(03)北大核心

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菌液PCR鑒定

按照SUMO蛋白酶說明書推薦的緩沖條件,3種重組蛋白均在4 ℃酶切過夜,Ni-NTA親和層析純化除標(biāo)簽,經(jīng)SDS-PAGE(圖5-A)鑒定表明,在目的條帶大小處有對應(yīng)條帶出現(xiàn),證明3種重組蛋白均被成功切開,獲得Cap-e1、Cap-e2和Cap-e12目的蛋白。Western Blotting(圖5-B)結(jié)果表明,3種重組蛋白均與PCV2的Cap單抗3H6發(fā)生特異免疫反應(yīng)。2.6 抗體測定

用PCV2抗體檢測試劑盒檢測血清抗體,圖6結(jié)果表明,在整個試驗過程中,除PBS組外,其他試驗組和疫苗組一樣,均能刺激機(jī)體持續(xù)產(chǎn)生針對Cap的抗體,在第2周時(圖6-A),Cap-e2組幾乎沒有與Cap特異反應(yīng)的抗體,Cap-e1組和Cap-e12組產(chǎn)生的抗體水平很低,疫苗組產(chǎn)生的抗體略高于試驗組。在第4周時(圖6-B),除PBS組外,其他組與Cap特異反應(yīng)的抗體均有大幅度提升,其中疫苗組顯著高于其他組,Cap-e12組顯著高于Cap-e1組和Cap-e2組,Cap-e2組也顯著高于Cap-e1組。在第6周時(圖6-C),抗體滴度持續(xù)上升,Cap-e12組同樣顯著高于Cap-e1組和Cap-e2組,Cap-e2組同樣顯著高于Cap-e1組,而疫苗組和Cap-e12無顯著差異。3 結(jié)論與討論

【參考文獻(xiàn)】：
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