腫瘤抑制因子TSC2（tuberin）是mTOR信號(hào)通路上游的負(fù)調(diào)節(jié)因子,具有GTPase激活蛋白（GTPase-activating protein,GAP）活性,調(diào)節(jié)著細(xì)胞內(nèi)DNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的合成;研究表明,TSC2能夠作為細(xì)胞內(nèi)的一種匯集多種信號(hào)的中心,在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、凋亡及胚胎發(fā)育等生理過程中發(fā)揮著重要的作用。然而,目前TSC2基因調(diào)控骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育的分子機(jī)制尚不明確。通過研究TSC2基因調(diào)控山羊成肌細(xì)胞增殖的分子機(jī)理,對(duì)調(diào)控動(dòng)物骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的理論意義和研究?jī)r(jià)值。本研究以分離純化后的奶山羊骨骼肌成肌細(xì)胞為試驗(yàn)材料,克隆獲得了山羊TSC2基因的編碼區(qū);通過過表達(dá)和干擾技術(shù)研究TSC2基因?qū)Τ杉〖?xì)胞增殖的作用;通過RT-qPCR和Western Blot等方法,分析TSC2基因過表達(dá)和干擾后對(duì)mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)和成肌細(xì)胞增殖的影響。該研究獲得了如下主要結(jié)果:1.山羊成肌細(xì)胞分離與鑒定以奶山羊羔羊半腱肌組織為試驗(yàn)材料,依次利用I型膠原酶和胰蛋白酶消化肌肉組織,利用差速貼壁法純化,最終得到成肌細(xì)胞。利用RT-PCR和免疫熒光染色法對(duì)分離純化后的成肌細(xì)胞進(jìn)行... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

骨骼肌發(fā)育過程示意圖(Bentzingeretal.2012)

TSC1/2復(fù)合體(Crinoetal.2010)

圖 1-4 mTOR分子結(jié)構(gòu)(Laplante et al. 2012)Figure 1-4 mTOR molecular structure已經(jīng)證實(shí)，mTOR 對(duì)胰島素/IGF-1 和氨基酸信號(hào)通路的整合作用可能蛋白質(zhì)合成調(diào)控中起重要作用(A Suryawan et al. 2010)。一方面，mTO醇 3-激酶（phosphatidylinositide 3-kinases，PI3K）/蛋白激酶 B（PKB）通路對(duì)生長(zhǎng)因子做出響應(yīng)。胰島素和胰島素樣生長(zhǎng)因子 1（I體的結(jié)合可引起胰島素受體底物（insulin receptor substrate，IRS）的結(jié)隨后的 PI3K 的結(jié)合。PI3K 與 IRS 的結(jié)合促進(jìn)細(xì)胞膜上磷脂酰肌醇hatidylinositol 4,5-bisphosphate, PIP2） 轉(zhuǎn) 化 為 磷 脂 酰 肌 醇 三atidylinositol 3,4,5-triphosphate, PIP3），該過程被同源性磷酸酶-張atase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）抑制。PIP酸肌醇依賴的激酶 1（3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1，P細(xì)胞膜上的結(jié)合，導(dǎo)致 PDK1 對(duì) Akt 的磷酸化和激活(Mendoza et al. 2


本文編號(hào)：2992161