為深入研究乙型腦炎病毒（JEV）NS1和NS1-2A蛋白的表達(dá)和免疫效果差異,本試驗(yàn)構(gòu)建并擴(kuò)增C-端含F(xiàn)lag標(biāo)簽的NS1和NS1-2A基因,利用T4 DNA連接酶分別連接到質(zhì)粒pcDNA3.1（+）上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag。將這兩種真核表達(dá)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞,利用RT-PCR、IFA和Western blotting檢測(cè)NS1和NS1-2A蛋白在體外的表達(dá)情況,用pcDNA3.1-NS1-Flag、pcDNA3.1-NS1-2A-Flag和pcDNA3.1（+）免疫BALB/c小鼠,檢測(cè)這兩種蛋白在體內(nèi)的表達(dá)差異。結(jié)果顯示,試驗(yàn)成功構(gòu)建了NS1和NS1-2A基因的真核表達(dá)載體pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag,IFA和Western blotting鑒定NS1和NS1-2A蛋白成功表達(dá),重組質(zhì)粒pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag免疫小鼠后可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性體液免疫,pcDNA3.1-NS1-2A-Flag聯(lián)合免疫組小鼠血清... 

【文章來源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(07)北大核心

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【部分圖文】：

NS1-2A-Flag和NS1-Flag PCR擴(kuò)增結(jié)果

重組質(zhì)粒pcDNA3.1-NS1-2A-Flag和pcDNA3.1-NS1-Flag的雙酶切鑒定結(jié)果

NS1-Flag和NS1-2A-Flag融合蛋白在BHK-21細(xì)胞中表達(dá),大小分別約為48.7和66.4 ku(圖5),Western blotting結(jié)果與預(yù)期結(jié)果相符,同NS1-2A-Flag具有較好的反應(yīng)原性。圖4 間接免疫熒光法檢測(cè)NS1、NS1-2A蛋白在BHK-21細(xì)胞中的表達(dá)(100×)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]我國(guó)流行性乙型腦炎研究近況[J]. 蔡寶祥.  畜牧與獸醫(yī). 2012(07)
[2]登革病毒2型NS1蛋白DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫效果觀察[J]. 江麗芳,高陽(yáng),方丹云,周俊梅.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2003(10)



本文編號(hào)：2990252