納米銅是較為常見的人造金屬納米材料。目前，已有相關(guān)的研究資料顯示納米銅可能對人類和環(huán)境存在潛在的危害，但是其毒性機制尚未清楚。為了研究納米銅的毒性機制，本試驗將大鼠隨機分成溶劑對照組（1％HPMC）、納米銅50mg/kg組、納米銅200mg/kg組，利用傳統(tǒng)毒理學的方法觀察納米銅重復染毒5d（1次/d）后大鼠的臨床表現(xiàn)、血液生化指標和組織病理學變化等毒理學效應；采用TCA-丙酮沉淀法提取蛋白，Bradford法定量蛋白，聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）檢測蛋白分離純化情況，同時對雙向電泳不同上樣量進行探索，建立大鼠肝臟蛋白質(zhì)組學研究技術(shù)平臺；然后以正常大鼠肝臟和不同程度染毒大鼠的肝臟為試驗材料，利用雙向電泳技術(shù)建立納米銅對大鼠肝臟毒性的蛋白質(zhì)表達圖譜；使用PDQuest8.0軟件對凝膠圖譜進行分析，并用生物質(zhì)譜對差異表達蛋白質(zhì)進行鑒定，同時對差異斑點3D掃描視圖；最后使用熒光定量PCR和Western-blot方法進行驗證。結(jié)果顯示：①200mg/kg納米銅能引起大鼠出現(xiàn)體重降低、腹瀉、行為失調(diào)、反應及呼吸減弱等中毒癥狀，與肝功能相關(guān)的ALT、ALP、TCHO、TP等血清生化指標... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
外文縮略詞表
第一部分 文獻綜述蛋白組學技術(shù)在納米藥物毒性研究中的應用
    1 納米技術(shù)
    2 納米材料的安全性研究進展
        2.1 納米材料的研究現(xiàn)狀
        2.2 納米材料的毒性研究概況
        2.3 納米銅的研究概況
    3 蛋白組學在納米藥物毒性研究中的研究進展
        3.1 系統(tǒng)毒理學研究概況
        3.2 蛋白組學及其技術(shù)手段
        3.3 蛋白組學在藥物毒性研究中的應用
    4 存在問題及展望
    5 本研究的目的意義及主要內(nèi)容
第二部分 試驗研究納米銅對大鼠肝臟毒性的差異蛋白組學研究
    前言
    試驗一 納米銅的亞急性毒性試驗
        1 材料
            1.1 實驗動物
            1.2 儀器
            1.3 試劑
        2 方法
            2.1 實驗動物分組及染毒方式
            2.2 生化指標分析
            2.3 組織病理學檢查
            2.4 統(tǒng)計方法
        3 結(jié)果
            3.1 一般毒性
            3.2 體重及臟器系數(shù)
            3.3 生化指標變化
            3.4 組織病理學變化
        4 討論
    試驗二 納米銅對大鼠肝臟毒性的2-DE圖譜的構(gòu)建及初步分析
        1 材料
            1.1 樣品
            1.2 儀器
            1.3 試劑
        2 方法
            2.1 中毒大鼠肝臟蛋白樣品的制備
            2.2 蛋白質(zhì)定量
            2.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測蛋白分離純化情況
            2.4 雙向電泳
        3 結(jié)果
            3.1 蛋白定量結(jié)果
            3.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果
            3.3 凝膠圖譜的獲取
        4 討論
    試驗三 納米銅對大鼠肝臟毒性的差異蛋白質(zhì)組學研究
        1 材料
            1.1 肝臟蛋白
            1.2 儀器
            1.3 試劑
        2 方法
            2.1 肝臟蛋白的溶解
            2.2 雙向電泳
            2.3 質(zhì)譜檢測
        3 結(jié)果
            3.1 2-DE圖譜的獲取
            3.2 質(zhì)譜鑒定結(jié)果
        4 討論
    試驗四 部分差異蛋白的熒光定量PCR及Western-blot驗證
        1 材料
            1.1 儀器
            1.2 試劑
        2 方法
            2.1 組織樣品
            2.2 總RNA的提取
            2.3 提取的總RNA的檢測
            2.4 引物的設(shè)計與合成
            2.5 熒光定量PCR
            2.6 Western-blot分析
        3 結(jié)果
            3.1 總RNA提取結(jié)果
            3.2 部分差異蛋白點在mRNA水平表達情況
            3.3 Western-blot結(jié)果
        4 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介
導師簡介



本文編號：2981860