目的：豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiration syndrome,PRRS）,是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種具有較強(qiáng)傳染性的常見豬病,病毒的一個(gè)典型特點(diǎn)就是極易變異,一旦爆發(fā),就會(huì)給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前針對(duì)該病主要是采取注射疫苗的方式進(jìn)行預(yù)防,但是,尚沒有針對(duì)患病個(gè)體的有效治療方法。本試驗(yàn)選擇3種天然化合物綠原酸、連翹酯苷A和表告依春,分別提取于具有抗病毒作用的常見中草藥金銀花、連翹和板藍(lán)根。以3D4/2細(xì)胞為體外模型,研究三種中藥高效成分是否具有增強(qiáng)豬肺巨噬細(xì)胞非特異性免疫的作用,是否能夠抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒對(duì)細(xì)胞的感染作用,是否能夠抑制由PRRS病毒引起的細(xì)胞凋亡,并初步探討這些中藥主要成分的抗病毒機(jī)制。方法：（1）采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法對(duì)所使用的3D4/2細(xì)胞進(jìn)行鑒定。（2）運(yùn)用細(xì)胞病變法（Cytopathic effect, CPE）以及噻唑藍(lán)比色法（3-（4,5-dimethyithiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT）來確定中藥化合物在3D4... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１正常３Ｄ４／２細(xì)胞及蘇木精染色后結(jié)果（Ｘ１００）??

圖２?３Ｄ４／２細(xì)胞鑒定結(jié)果（ｘ２００）??Ｆｉｇ．２?３Ｄ４／２?ｃｅｌｌｓ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?（＾２００）??（Ａ）用表皮生長因子樣激素受體１抗體作為一抗，正常３Ｄ４／２細(xì)胞出現(xiàn)陽性反應(yīng)（Ｂ）用??ＰＢＳ代替表皮生長因子樣激素受體１抗體，作為對(duì)照姐，未出現(xiàn)陽性反應(yīng)。??）?Ｗｉ化化ｅ?Ｆ４／８０?ａｎｔ化ｏｄｉｅｓ?ａｓ?化ｅ?ｆｉｒｓｔ?ａｎｔ化ｏｄｙ，ｎｏｒｍａｌ?３Ｄ４／２?ｃｅｌｌｓ?ｓｈｏｗｅｄ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ．（Ｂ）?Ｉｎｓ化ａｄ?ｏｆ??Ｆ４／８０?ａｎｔ化ｏｄｙ?ｗｉ化?Ｐ目Ｓ?ａｓ?ａ?ｃｏｎ化ｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｄｉｄ?ｎｏｔ?ａｐｐｅａｒ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ．??圖中出現(xiàn)蹤黃色位冒為陽性反應(yīng)部位，表明該部分有仙應(yīng)抗版與所用抗體結(jié)合，??色指示細(xì)胞核Ｗ及細(xì)胞質(zhì)中的嗜堿性物質(zhì)。山閣２可見，細(xì)胞表現(xiàn)山對(duì)Ｆ４／８０抗??陽性反應(yīng)，且特巧巧衷達(dá)在細(xì)胞膜，說明細(xì)胞表面有表皮生長因子樣激素受體１。??藥物最適濃度結(jié)果??經(jīng)試驗(yàn)并對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理后確定各藥物的最大安全濃度（可使９０％Ｗ上的??／２細(xì)胞巧常存活的藥物濃度）為：綠原酸的最大安全濃度為２５０?＾１３／１１止，連翔醋昔??最大安全濃度為１２５ｉ／ｍＬ，表告依春的最大安全濃度為１０００ｙｇ／ｍＬ。??

ｐｏｓｉｔｉｖｅ．（Ｂ）?Ｉｎｓｔｅａｄ?ｏｆ?Ｍ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｆ?ＰＲＲＳＶ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｗｉｔｈ?ＰＢＳ?ａｓ?ａ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｄｉｄ?ｎｏｔ?ａｐｐｅａｒ??ｐｏｓｉｔｉｖｅ．??由圖３可見，攻毒后３Ｄ４／２細(xì)胞出現(xiàn)了化性反應(yīng)。目前的研究衷明，巨峰細(xì)胞本??身具有巧晦能力，但巨晦細(xì)胞將病毒吞晦后所俘化的部位應(yīng)該屆細(xì)胞質(zhì)而非細(xì)胞核，??試驗(yàn)結(jié)果中可Ｗ看到細(xì)胞核中也出現(xiàn)陽性反應(yīng)，說明出現(xiàn)陽性反應(yīng)不僅僅是吞噓所致，??也存在ＰＲＲＳＶ對(duì)巨略細(xì)胞的主動(dòng)侵染，其侵染部位包括細(xì)胞核。??４小結(jié)??細(xì)胞免疫化學(xué)的結(jié)果衷明，ＰＲＲＳＶ能夠?qū)Γ常模矗布?xì)胞進(jìn)行侵染，攻毒后能夠使??３Ｄ４／２細(xì)胞產(chǎn)生病變。說明３Ｄ４／２細(xì)胞能被ＰＲＲＳＶ感染，并且觀察到病毒的侵染部位??是細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。??－２１?－??

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
[1]豬肺泡巨噬細(xì)胞（PAM）極化模型的建立及PRRSV感染過程中動(dòng)態(tài)變化研究[D]. 徐璐.延邊大學(xué) 2014
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本文編號(hào)：2980822