親吻素（Kissl）和卵泡刺激素受體（Follicle Stimulating Hormone Receptor, FSHR）基因?qū)Ξa(chǎn)仔數(shù)有顯著影響,在家畜繁殖生理學(xué)領(lǐng)域占有重要地位。Kissl是公認(rèn)的下丘腦促性腺激素釋放激素（Gonadotropin Releasing Hormone, GnRH）上游重要調(diào)控因子,在性腺軸系統(tǒng)中起中樞節(jié)點(diǎn)的作用,能直接作用于GnRH神經(jīng)元,刺激GnRH的分泌,激活性腺軸,并且在發(fā)情周期內(nèi)正向調(diào)控黃體生成素（Luteinizing Hormone, LH）和卵泡刺激素（Follicle Stimulating Hormone, FSH）的分泌。在雌性哺乳動物中,卵泡刺激素的主要作用是促進(jìn)性腺發(fā)育和維持正常的生殖功能,促進(jìn)卵巢中卵泡的生長、卵泡顆粒細(xì)胞的增生和雌激素的合成與分泌,刺激卵泡細(xì)胞上LH受體的產(chǎn)生。它對卵泡生長發(fā)育和成熟分化起重要調(diào)控作用,直接影響卵泡發(fā)育的數(shù)量和質(zhì)量,而FSHR是FSH發(fā)揮生理功能不可或缺的重要因素。本文旨在探究Kissl和FSHR基因與繁殖功能之間的關(guān)系,以豬的Kissl和FSHR基因?yàn)檠芯繉ο?將構(gòu)建的小鼠腦部特異表達(dá)的... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略表
目錄
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 引言
        1.1 Kiss1/GPR54基因的定義
        1.2 Kiss1/GPR54系統(tǒng)的分布
        1.3 Kiss1/GPR54系統(tǒng)與繁殖系統(tǒng)的關(guān)系
            1.3.1 Kiss1/GPR54系統(tǒng)與生殖系統(tǒng)發(fā)育
            1.3.2 Kisspeptin/GPR54在下丘腦的表達(dá)
            1.3.3 Kiss1和Kisspeptin在其他部位的表達(dá)
        1.4 FSHR的研究概況
            1.4.1 FSHR的定義與結(jié)構(gòu)
            1.4.2 FSHR的生理功能
        1.5 pCaMKⅡ啟動子的研究進(jìn)展
        1.6 轉(zhuǎn)基因動物研究進(jìn)展
            1.6.1 轉(zhuǎn)基因動物研究概況
            1.6.2 轉(zhuǎn)基因動物制備方法
                1.6.2.1 原核顯微注射技術(shù)
                1.6.2.2 慢病毒載體法
                1.6.2.3 體細(xì)胞核移植法
                1.6.2.4 RNAi介導(dǎo)的基因沉默
            1.6.3 轉(zhuǎn)基因動物研究展望
        1.7 課題來源與研究背景
第二章 豬Kiss1基因克隆及真核表達(dá)載體pCaMKⅡ-Kiss1和AMH-pFSHR的構(gòu)建
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
            1.1.1 菌種與質(zhì)粒來源
            1.1.2 引物、工具酶及其他試劑
            1.1.3 其他相關(guān)試劑配制
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 豬Kiss1基因的克隆及鑒定
                1.2.1.1 豬下丘腦總RNA提取
                1.2.1.2 豬Kiss1基因的擴(kuò)增
                1.2.1.3 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化
                1.2.1.4 菌液PCR擴(kuò)增目的基因
                1.2.1.5 質(zhì)粒DNA提取
                1.2.1.6 酶切鑒定
            1.2.2 pCaMK Ⅱ-Kiss1真核載體構(gòu)建
                1.2.2.1 pCaMKⅡ載體的鑒定
                1.2.2.2 pCaMKⅡ載體和pMD19-T-Kiss1載體酶切鑒定
                1.2.2.3 重組載體pCaMKⅡ-Kiss1的構(gòu)建
                1.2.2.4 質(zhì)粒DNA提取
            1.2.3 AMH-pFSHR真核表達(dá)載體的雙酶切鑒定
            1.2.4 重組質(zhì)粒的線性化
    2 結(jié)果與分析
        2.1 豬Kiss1基因的克隆
        2.2 pCaMK Ⅱ-Kiss1真核載體構(gòu)建
        2.3 AMH-pFSHR真核表達(dá)載體的構(gòu)建
    3 討論
第三章 原核顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因小鼠及其鑒定
    1 轉(zhuǎn)基因小鼠的制備的材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.1.2 雌鼠發(fā)情周期的判斷
            1.1.3 小鼠的超排
            1.1.4 受精卵獲取
            1.1.5 受精卵的移植
        1.2 轉(zhuǎn)基因小鼠制備
            1.2.1 轉(zhuǎn)基因小鼠制備流程圖
    2 轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
        2.1 材料與方法
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
                2.1.1.1 引物和探針
                2.1.1.2 相關(guān)試劑的配制
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
                2.1.2.1 鼠尾組織DNA提取
                2.1.2.2 Southern blot檢測
                2.1.2.3 Gonome Walking
    3 結(jié)果與分析
        3.1 轉(zhuǎn)基因小鼠的PCR檢測與Southern blot驗(yàn)證
        3.2 轉(zhuǎn)基因小鼠Genome Walking驗(yàn)證
        3.3 轉(zhuǎn)基因小鼠子代產(chǎn)仔數(shù)統(tǒng)計(jì)
    4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄1 顯微注射豬Kiss1基因的DNA序列（8456bp）
附錄2 顯微注射豬FSHR基因的DNA序列（5844bp）
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CaMKⅡα基因啟動子的克隆和神經(jīng)細(xì)胞特異性Cre表達(dá)載體的構(gòu)建[J]. 徐瑛,周常文,林炤華,柯琦.  中國優(yōu)生與遺傳雜志. 2008(03)
[2]小鼠發(fā)情周期觀察與最佳超排時(shí)期的確定[J]. 傅文棟,孫玉成,索倫,高建明.  北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào). 2005(02)



本文編號：2979260