體細胞克隆技術在理論和實踐上都具有巨大的價值，但目前克隆效率普遍低下，這已成為制約克隆技術在生產(chǎn)上廣泛應用的主要原因。為提高體細胞克隆的效率，研究人員對克隆技術的各個環(huán)節(jié)進行了優(yōu)化。其中，培養(yǎng)液的優(yōu)化是研究的熱點之一。白藜蘆醇作為抗氧化劑，能夠幫助調(diào)節(jié)胚胎細胞發(fā)育狀態(tài)和凋亡；表皮生長因子（EGF）、胰島素樣生長因子（IGF）已經(jīng)被證實能夠對牛胚胎發(fā)育起促進作用；轉鐵蛋白和礦物元素同樣也是胚胎發(fā)育所必須的；同時，許多促進重編程的因子也被添加到胚胎體外培養(yǎng)體系中來。本實驗在傳統(tǒng)培養(yǎng)液的基礎上，針對胚胎培養(yǎng)體系高氧化壓力導致的胚胎發(fā)育損傷問題，以孤雌生殖和體外受精胚胎為模型，利用EGF、ITS作為血清替代物，添加白藜蘆醇研制新型限定培養(yǎng)液，同時也為下一步將其應用于體細胞克隆胚胎奠定基礎。本實驗的主要研究內(nèi)容和結果如下：1.以孤雌生殖胚胎和體外受精胚胎為模型，探究白藜蘆醇對牛胚胎體外發(fā)育能力的作用。篩選出了0.5μM為促進胚胎發(fā)育的最適濃度，發(fā)現(xiàn)其能夠加速胚胎卵裂，促進囊胚形成；能夠增加牛胚胎體外發(fā)育囊胚細胞數(shù)、增加內(nèi)細胞團比例；能夠上調(diào)凋亡抑制基因Bcl-2和下調(diào)凋亡促進基因Bax，降低囊胚... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 體細胞核移植
    1.2 影響體細胞核移植效率的因素
    1.3 體細胞核移植的重編程
    1.4 胚胎體外培養(yǎng)體系
        1.4.1 胚胎培養(yǎng)液
        1.4.2 無血清培養(yǎng)液
    1.5 白藜蘆醇
第二章 白藜蘆醇對牛胚胎體外發(fā)育的影響
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 儀器設備
        2.1.3 試劑耗材與配方
        2.1.4 卵母細胞的采集及體外成熟培養(yǎng)
        2.1.5 孤雌激活
        2.1.6 體外受精
        2.1.7 囊胚差異染色及細胞計數(shù)
        2.1.8 囊胚凋亡染色
        2.1.9 胚胎發(fā)育各時期 ROS 水平檢測
        2.1.10 免疫熒光強度分析
        2.1.11 胚胎 cDNA 的提取獲得
        2.1.12 RT-PCR 檢測
        2.1.13 試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析
    2.2 實驗結果
        2.2.1 白藜蘆醇對牛孤雌激活胚胎體外發(fā)育率的影響
        2.2.2 白藜蘆醇對牛體外發(fā)育囊胚總細胞數(shù)的影響
        2.2.3 白藜蘆醇對牛體外發(fā)育 PA 和 IVF 囊胚凋亡的影響
        2.2.4 白藜蘆醇對牛體外發(fā)育 PA 和 IVF 胚胎細胞內(nèi) ROS 的影響
    2.3 討論
    2.4 小結
第三章 限定培養(yǎng)液培養(yǎng)效果的研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 儀器設備
        3.1.3 試劑耗材與配方
        3.1.4 卵母細胞的采集及體外成熟培養(yǎng)
        3.1.5 孤雌激活
        3.1.6 囊胚差異染色及細胞計數(shù)
        3.1.7 囊胚凋亡染色
        3.1.8 試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析
    3.2 實驗結果
        3.2.1 不同培養(yǎng)液對牛孤雌激活胚胎體外發(fā)育率的影響
        3.2.2 不同培養(yǎng)液對牛體外發(fā)育囊胚總細胞數(shù)的影響
        3.2.3 不同培養(yǎng)液對牛體外發(fā)育囊胚凋亡的影響
    3.3 討論
    3.4 小結
全文結論
參考文獻
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]生長因子EGF、bFGF對豬孤雌胚體外發(fā)育的影響[J]. 劉吉,潘登科,張莉,牟玉蓮,張勇,楊述林,王子榮,馮書堂.  畜牧獸醫(yī)學報. 2007(01)

博士論文
[1]細胞內(nèi)ROS水平改變對細胞活性及相關信號傳導途徑的影響[D]. 秦勇.浙江大學 2012

碩士論文
[1]不同培養(yǎng)基對牛轉基因克隆胚發(fā)育及印跡基因Igf2甲基化狀況的影響[D]. 蘇建民.西北農(nóng)林科技大學 2009
[2]BCB染色法篩選牛卵母細胞的初探[D]. 曹澤磊.西北農(nóng)林科技大學 2009
[3]牛體外受精技術體系的優(yōu)化研究[D]. 胡林勇.西北農(nóng)林科技大學 2008



本文編號：2978680