為研究重組桿狀病毒RHDV-VP60株表達(dá)VP60蛋白及其效果的情況,將RHDV-VP60株接種Sf9細(xì)胞制備家兔出血癥病毒樣顆粒蛋白,與鋁膠佐劑混合制成滅活疫苗,進(jìn)行安全檢驗(yàn)、最小免疫劑量測(cè)定及免疫持續(xù)期研究。結(jié)果顯示,3批VP60蛋白病毒樣顆�？乖旱难r(jià)為1∶2¹⁸～1∶2¹⁹。3批疫苗以超劑量（每只2.0 mL）免疫家兔未見任何不良反應(yīng);對(duì)兔的最小免疫劑量為每只0.5 mL;免疫后第14天,血清RHDV HI效價(jià)為1∶16～1∶64,攻毒后5/5健活;疫苗免疫持續(xù)期達(dá)210 d。上述研究結(jié)果表明,重組桿狀病毒RHDV-VP60株可高效表達(dá)VP60蛋白并能形成病毒樣顆粒,用其制備的疫苗安全性及免疫效果良好,解決了傳統(tǒng)疫苗生產(chǎn)過程所存在的生物安全風(fēng)險(xiǎn)以及重組蛋白表達(dá)量低的問題。 

【文章來源】：中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(08)北大核心

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重組桿狀病毒RHDV-VP60株VP60基因PCR鑒定Figure1Polymerasechainreactionoftherecombinantba-250bp100bp

中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)第50卷圖2重組桿狀病毒RHDV-VP60株表達(dá)VP60蛋白SDS-PAGE檢測(cè)Figure2PolyacrylamidegelelectrophoresisoftheVP60proteinexpressedbytherecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainM：蛋白marker；1：Sf9細(xì)胞對(duì)照；2：重組桿狀病毒RHDV-VP60株。M：Proteinmolecularweightmarker；1：Sf9cellscontrol；2：Recombi-nantbaculovirusRHDV-VP60strain.圖1重組桿狀病毒RHDV-VP60株VP60基因PCR鑒定Figure1Polymerasechainreactionoftherecombinantba-culovirusRHDV-VP60strainVP60geneM：DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1：陰性對(duì)照；2：重組桿狀病毒RHDV-VP60株。M：DL5000DNAMarker；1：Negativecontrol；2：Recombinantbaculovi-rusRHDV-VP60strain.12M5000bp3000bp2000bp1500bp1000bp750bp500bp250bp100bp12M250ku130ku100ku70ku55ku35ku25ku15ku圖3間接免疫熒光（IFA）檢測(cè)結(jié)果（200×）Figure3IndirectimmunofluorescencedetectionresultA：重組桿狀病毒RHDV-VP60株感染的Sf9細(xì)胞；B：空白對(duì)照Sf9細(xì)胞；C：陰性血清對(duì)照。A：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVpositiveserum；B：Sf9cellscontrol；C：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVnegativeserum.2.4安全檢驗(yàn)3批疫苗分別經(jīng)頸背部皮下超劑量接種1.5～3.0kg的健康易感家兔4只，每只2.0mL。接種后觀察7d，精神、采食、飲水、糞便、體溫等無異常，剖檢后觀察注射部位均無結(jié)節(jié)形成，疫苗吸收良好。2.5疫苗的最小免疫劑量測(cè)定3批疫苗接種后第14天，對(duì)照兔血清RHDVHI效價(jià)均＜1∶4，每只0.25mL免疫組HI效價(jià)為1∶8～1∶16，每只0.5mL免疫組HI效價(jià)

oteinmolecularweightmarker；1：Sf9cellscontrol；2：Recombi-nantbaculovirusRHDV-VP60strain.圖1重組桿狀病毒RHDV-VP60株VP60基因PCR鑒定Figure1Polymerasechainreactionoftherecombinantba-culovirusRHDV-VP60strainVP60geneM：DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1：陰性對(duì)照；2：重組桿狀病毒RHDV-VP60株。M：DL5000DNAMarker；1：Negativecontrol；2：Recombinantbaculovi-rusRHDV-VP60strain.12M5000bp3000bp2000bp1500bp1000bp750bp500bp250bp100bp12M250ku130ku100ku70ku55ku35ku25ku15ku圖3間接免疫熒光（IFA）檢測(cè)結(jié)果（200×）Figure3IndirectimmunofluorescencedetectionresultA：重組桿狀病毒RHDV-VP60株感染的Sf9細(xì)胞；B：空白對(duì)照Sf9細(xì)胞；C：陰性血清對(duì)照。A：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVpositiveserum；B：Sf9cellscontrol；C：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVnegativeserum.2.4安全檢驗(yàn)3批疫苗分別經(jīng)頸背部皮下超劑量接種1.5～3.0kg的健康易感家兔4只，每只2.0mL。接種后觀察7d，精神、采食、飲水、糞便、體溫等無異常，剖檢后觀察注射部位均無結(jié)節(jié)形成，疫苗吸收良好。2.5疫苗的最小免疫劑量測(cè)定3批疫苗接種后第14天，對(duì)照兔血清RHDVHI效價(jià)均＜1∶4，每只0.25mL免疫組HI效價(jià)為1∶8～1∶16，每只0.5mL免疫組HI效價(jià)為1∶16～1∶64，每只1.0mL劑量組HI效價(jià)為1∶16～1∶128（見圖5）。同時(shí)，接種后第14天攻毒，未免疫對(duì)照組5/5死亡，每只0.25mL免疫組3/5～4/5保護(hù)，每只0.5mL和每只1.0mL免疫組均5/5保護(hù)（見表1）。2.6免疫持續(xù)期三批疫苗以每只1.0mL的劑量免

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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