為了確定引起綿羊呼吸道傳染病的病原,本研究于2019年對(duì)一患急性呼吸道疾病死亡綿羊的病料進(jìn)行了病毒分離,從其胸腔積液中分離到一株綿羊副流感病毒3型（OPIV3）,命名為PE2019株。該病毒能夠在MDBK細(xì)胞上增殖,產(chǎn)生細(xì)胞圓縮、集聚成簇等為特征的細(xì)胞病變;電子顯微鏡觀察可見OPIV3 PE2019株為直徑約300 nm的圓形粒子;經(jīng)檢測該分離株病毒滴度為10^7.8TCID₅₀/mL。分離株對(duì)小鼠和豚鼠的紅細(xì)胞血凝價(jià)均為164,不凝集雞、兔、綿羊和牛的紅細(xì)胞。參考山羊副流感病毒3型全基因組序列（MK091103）,設(shè)計(jì)其N和M基因特異性引物,通過RT-PCR可從病毒細(xì)胞培養(yǎng)物中擴(kuò)增到特異性片段,對(duì)其進(jìn)行序列分析,結(jié)果顯示,分離株N基因序列與山羊、牛和人副流感病毒3型參考株的基因同源性分別為84.0%、82.1%和78.8%,M基因序列與山羊、牛和人副流感病毒3型參考株的基因同源性分別為81.5%、78.4%和77.6%,OPIV3 N和M基因均為獨(dú)立一個(gè)分支。本研究首次于國內(nèi)分離到OPIV3,為了解國內(nèi)OPIV3的流行情況及疫苗的研制奠定了基... 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,42(05)北大核心

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【部分圖文】：

病毒分離株P(guān)E2019在MDBK上的CPE

病毒分離株P(guān)E2019接種MDBK細(xì)胞上清，經(jīng)電鏡負(fù)染觀察可見帶有囊膜、圓形、直徑約300 nm的病毒粒子（圖2）；此外，可觀察到病毒基因組釋放出核衣殼呈長絲帶狀，與副黏病毒病毒粒子形態(tài)特征相符，進(jìn)一步證明分離株為副黏病毒。2.4 血凝試驗(yàn)結(jié)果

病毒分離株P(guān)E2019 F3代病毒均不凝集雞、兔、綿羊和牛的0.5%紅細(xì)胞，但對(duì)小鼠和豚鼠的0.5%紅細(xì)胞凝集效價(jià)均為26，凝集價(jià)較高。2.5 RT-PCR鑒定及序列分析結(jié)果提取分離株P(guān)E2019基因組RNA，用NF引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，再用N和M基因特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果獲得分別約750 bp和1 200 bp的目的片段（圖3）。對(duì)分離株P(guān)E2019的N和M基因進(jìn)行序列測定，截取N基因的680 bp的部分基因和M基因全長1 059 bp，與GenBank中登錄的CPIV3、BPIV3和HPIV3的不同參考株序列進(jìn)行核苷酸序列同源性分析。結(jié)果顯示，N基因序列同源性與3類病毒中參考株最高分別為84.0%、82.1%和78.8%,M基因序列同源性與3類病毒中參考株最高分別為81.5%、78.4%和77.6%，且N和M基因均為獨(dú)立一個(gè)分支（圖4）。表明分離株為PIV3，但與CPIV3、BPIV3和HPIV3均親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，為一新的病毒株，由于分離株是從綿羊體內(nèi)分離獲得，故將分離株確定為OPIV3。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]廣西部分地區(qū)山羊源副流感病毒3型的血清學(xué)調(diào)查[J]. 閉璟珊,王衛(wèi)雪,韋顯凱,蘇姣秀,鄭敏.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(06)
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