發(fā)布時間：2020-12-29 00:31

　　雞白痢沙門菌是當(dāng)前危害我國養(yǎng)禽業(yè)的重要病原菌,每年均造成了較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失�！秶抑虚L期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》明確要求實(shí)施雞白痢凈化工程,養(yǎng)殖企業(yè)主要采取血清學(xué)診斷方法進(jìn)行雞白痢的檢疫,淘汰陽性雞達(dá)到凈化雞群的目的。疫苗可作為凈化的輔助手段,其中減毒活疫苗與滅活疫苗和亞單位疫苗相比,不僅具有持久刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫、細(xì)胞免疫和黏膜免疫應(yīng)答的特點(diǎn),還可以通過基因缺失策略設(shè)計(jì)為區(qū)分自然感染與疫苗免疫動物的DIVA疫苗,這對種群中雞白痢的凈化具有重要意義,顯示出廣闊的應(yīng)用前景。我們在前期研究構(gòu)建的雞白痢沙門菌aroA基因缺失株S004AaroA基礎(chǔ)上,運(yùn)用λ-Red同源重組的方法進(jìn)一步成功構(gòu)建了雞白痢沙門菌spB、crp和rfaG基因的多基因缺失株,并通過對其生物學(xué)特性、致病性和免疫效力進(jìn)行評價,篩選出較理想的減毒疫苗候選株,為進(jìn)一步研發(fā)雞白痢沙門菌減毒疫苗奠定基礎(chǔ)。1.雞白痢沙門茵spB、crp和rfaG基因缺失株的構(gòu)建及生物學(xué)特性的測定選擇與雞白痢沙門菌侵襲力和耐高滲能力相關(guān)的基因sipB、與菌毛表達(dá)相關(guān)的基因crp和與脂多糖合成相關(guān)的基因rfaG設(shè)計(jì)引物,以S00... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１沖５和ｃｒｐ基因的ＰＣＲ擴(kuò)增??Ｆｉｇ．?１－１?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｓｉｐＢ?ａｎｄ?ｃｒｐ?ｇｅｎｅｓ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｒ

缺失株在不添加葡萄糖的ＬＢ培養(yǎng)基中，生長速度較野生株減緩，且生長速度在??添加葡萄糖后得到回升，在葡萄糖濃度達(dá)到〇．〇５％后，可以達(dá)到和野生株Ｓ００４??相近水平（圖１－８？１０）。??１?ｇ??，?？?Ｓ００４??＾?Ｓ０（Ｍ＾ｃｒｐ＋ＬＢ??ｇ?１２＂?Ｓ００４Ａｃｒｐ＋０．０１％Ｇ?ＬＢ??Ｉ?１?°＇?？＊？？釀?Ａｃｒｐ＋０?０５％Ｇ?ＬＢ??〇?Ｓ｛ＫＭ＾ｃｒｐ＋０，０８％Ｇ?Ｌ８??°?°６＇?—■夸?Ｓ００４Ａｃｒｐ＋０．１％ＧＬＢ??°４＇?－ｍ－?Ｓ００４Ａｃｒｐ＋０．５％Ｇ?ＬＢ??０．２．??０．０１ｊｊ?ｖｖ；＇＇？＇＃Ｌ－ｉ＂，ｖ－ＬＵ，ｖ＇ｖ＇ｉｒｎ?ｉｋｕｕｊ＂ｕ－ｉｉｊｕ；ｊａｖｒ．…－＊．．．．．．．．．．．．．?ｉ??＼??〇?２?４?Ｓ?８?１０?１２??Ｔｌｍａ／ｈ??圖ｌ－８Ｓ０

??圖１－１４?Ｓ００４Ａｗ＾ＡｃｒｐＡｒ／ａＧ和Ｓ００４Ａ＾＾４Ａ沖５Ａｒ／ａＧ基因缺失突變株傳代ＰＣＲ鑒定圖??Ｆｉｇ．?１－１４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ＳＯＯＡＡａｒｏＡＡｓｉｐＢＡｒｆａＧ?ａｎｄ?Ｓ００４ＡａｒｏＡＡｃｒｐＡｒｆａＧ?ｇｅｎｅ??ｄｅｌｅｔｉｏｎ?ｍｕｔａｎｔｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１，７：?Ｓ００４?ｗｉｌｄ?ｔｙｐｅ：?１２８４?ｂｐ??２？６：?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ａｒｏｊ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ｓ００４Ａａｒａ４ＡｃｒｐＡ吻Ｇ?７０－５０：?４４２?ｂｐ；??８？１２：?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ａｒａｊ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?ＳＯＣＭＡａ／＾＾Ａｓ＾＾Ａ／＾Ｇ１?坪從廣“＂０／７?／０－５０：?４４２ｂｐ??３．３．５上皮細(xì)胞的黏附與入侵試驗(yàn)??當(dāng)ＨｅＬａ細(xì)胞形成單層后，以１００ＭＯＩ的接種量接種野生株Ｓ００４和基因突??變株?Ｓ００４Ａａｒ〇ｙ４、Ｓ００４ＡａｒａＪＡ５７＞５、Ｓ００４ＡａｒｏＪＡｃｒｐ、ＳＣＫＭＡａｒａＪＡ＾ｂＳＡ響Ｇ??和Ｓ００４ＡａｒａＪＡｃｒ／７Ａｒ／ａａ進(jìn)行上皮細(xì)胞的黏附與入侵試驗(yàn)；與野生株Ｓ００４相??比，帶有＿５基因的缺失株黏附與入侵率均極顯著降低（Ｐ＜０．０１），?Ｓ００４ＡａｒｏＪ??單基因缺失株和Ｓ００４Ａａｒａ４Ａａｐ的黏附與侵入能力與野生株相比均無顯著差異??（？＞０．０５），?Ｓ００４／Ｗ？＾Ａｃｒ／？、Ｓ００４ＺＷｒｏｄＡｃｒ；７Ａｒ／ａＣ７?缺失株黏附的黏附率較野生??株下降了?５２．３２％


本文編號：2944652