沙門氏菌能夠通過Ⅲ型分泌系統(tǒng)（Type III secretion systems,T3SS）分泌細菌蛋白（效應蛋白）到宿主細胞里,從而調(diào)控宿主一系列生理功能。沙門氏菌有兩種不同的T3SS,分別為由毒力島（Salmonella pathogenicity islands,SPI）-1編碼的T3SS-1和由SPI-2編碼的T3SS-2。泛素化作為蛋白翻譯后的一種修飾方式,在抵抗細菌感染時發(fā)揮重要作用,然而細菌也能夠利用T3SS分泌系統(tǒng),通過各種泛素途徑對宿主進行瞬時和空間調(diào)控。有文獻報道,細菌可以通過含有LRR結構域的E3泛素連接酶調(diào)控宿主的天然免疫反應。如福氏志賀菌IpaH9.8通過泛素化降解NEMO,從而抑制NF-κB信號通路的激活;IpaH4.5通過泛素化降解TBK1,從而抑制IRF3的磷酸化、入核及IFN的產(chǎn)生。沙門氏菌E3泛素連接酶SspH2和SlrP也具有LRR結構域,然而目前并沒有研究報道SspH2和SlrP在IFN信號通路中的作用。為研究沙門氏菌E3泛素連接酶SspH2和SlrP在IFN信號通路中的作用,本研究首先篩選到一株能正常編碼并表達SspH2和SlrP蛋白的沙門氏... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 沙門氏菌微生物學特性
        1.1.1 沙門氏菌的流行狀況及臨床特征
        1.1.2 沙門氏菌的血清型
        1.1.3 沙門氏菌的致病機制
    1.2 I型 IFN的產(chǎn)生及其調(diào)控機制
        1.2.1 I型 IFN
        1.2.2 I型 IFN信號通路
        1.2.3 沙門氏菌感染時產(chǎn)生的I型 IFN
    1.3 細菌E3泛素連接酶蛋白
        1.3.1 不同細菌E3 泛素連接酶蛋白調(diào)控天然免疫的研究進展
        1.3.2 沙門氏菌E3 泛素連接酶蛋白調(diào)控天然免疫的研究進展
    1.4 本研究的目的與意義
第二章 沙門氏菌E3 泛素連接酶SspH2和SlrP調(diào)控I型 IFN信號通路的研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株、細胞株和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑和抗體
        2.1.3 主要儀器設備
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 全基因組測序
        2.2.2 細菌DNA的提取
        2.2.3 原核表達質(zhì)粒的構建
        2.2.4 原核質(zhì)粒表達和蛋白純化
        2.2.5 多抗的制備及檢測
        2.2.6 ssph2和slrP基因缺失株的構建
        2.2.7 野生菌與基因缺失株生長曲線的測定
        2.2.8 真核表達質(zhì)粒的構建和轉(zhuǎn)染
        2.2.9 雙熒光素酶報告系統(tǒng)試驗
        2.2.10 Western blotting檢測
        2.2.11 免疫共沉淀試驗
        2.2.12 細菌侵染細胞試驗
        2.2.13 統(tǒng)計學方法
    2.3 實驗結果
        2.3.1 全基因組測序結果
        2.3.2 SspH2、SlrP原核表達和蛋白純化
        2.3.3 多抗識別外源性和內(nèi)源性表達的SspH2、SlrP蛋白
        2.3.4 ssph2和slrP基因缺失株的構建及鑒定
            2.3.4.1 PCR鑒定ssph2和slrP基因缺失株構建成功
            2.3.4.2 Western blotting鑒定ssph2和slrP基因缺失株構建成功
        2.3.5 ssph2和slrP基因缺失不影響沙門氏菌的生長
        2.3.6 SspH2 抑制I型 IFN信號通路
            2.3.6.1 SspH2 抑制IFN和 ISRE啟動子活性
            2.3.6.2 SspH2 與干擾素調(diào)控因子IRF3 相互作用
            2.3.6.3 SspH2 增強IRF3 的泛素化
            2.3.6.4 SspH2 影響IRF3 的表達
        2.3.7 SlrP不影響I型 IFN信號通路
            2.3.7.1 SlrP與天然免疫關鍵分子MDA5、RIG-I、MAVS、TANK等相互作用
            2.3.7.2 SlrP不影響IFN和 ISRE啟動子活性
            2.3.7.3 SlrP對 IRF3 的表達無影響
    2.4 討論
第三章 全文結論
參考文獻
附錄
    1.CVCC542和CVCC542Δssph2菌株的ssph2核酸序列比對結果
    2.CVCC542和CVCC542ΔslrP菌株的slrP核酸序列比對結果
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]沙門菌致病島2Ⅲ型分泌系統(tǒng)研究進展[J]. 殷俊磊,李求春,焦新安.  微生物學報. 2016(04)



本文編號：2928429