發(fā)布時(shí)間：2020-12-14 11:29

　　豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)引起豬嚴(yán)重的腹瀉并可導(dǎo)致仔豬死亡,尤其是2周齡以內(nèi)仔豬死亡率高達(dá)100%,很容易和其它腸道病毒發(fā)生混合感染,并且和豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的臨床癥狀極為相似,給病原的檢測(cè)造成困擾。本實(shí)驗(yàn)用抗TGEV重組N蛋白的單克隆抗體和多克隆抗體建立一種捕獲抗原的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法,經(jīng)過(guò)檢驗(yàn),效果良好,可以做為病原診斷的可靠簡(jiǎn)便的方法。本研究從以下幾個(gè)方面展開:1、抗TGEV重組N蛋白單克隆抗體的制備。利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)TGEV重組N蛋白,經(jīng)過(guò)純化和鑒定后免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞按常規(guī)方法融合篩選后得到2株能穩(wěn)定分泌抗重組N蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞株2G7和2C2。2株單抗亞類均為IgG1;間接免疫熒光表明2株單抗能識(shí)別細(xì)胞中的TGEV,感染細(xì)胞呈現(xiàn)亮綠色熒光;雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清效價(jià)穩(wěn)定在1:12800;腹水的間接ELISA效價(jià)均為1:10~8。結(jié)果表明2株單抗細(xì)胞株遺傳穩(wěn)定,分泌的抗體特異性好。2、抗TGEV全病毒和重組N蛋白多抗血清的制備。將純化的病毒和重組N蛋白分別免疫家兔,采集血清經(jīng)過(guò)蛋白A親和層析純化得到2種多抗血... 

【文章來(lái)源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

單抗亞類鑒定結(jié)果

圖 5-1 特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig5-1. Results of specialization test法敏感性毒（1337μg/ml）稀釋度 1:20、1:40、1:80、的臨界值和 P/N 值可得該 ELISA 方法可以原濃度為 13.37μg/ml，即該方法最低病毒檢表 5-9 夾心 ELISA 方法敏感性Table 5-9 The sensitivity of the sanwich ELISAmetho 40 80 100 51 0.437 0.275 0.260 65 3.564 2.244 2.122

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬傳染性胃腸炎病毒S基因主要抗原位點(diǎn)A和D的原核表達(dá)及間接ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 牟春曉,朱立麒,邢憲平,楊倩.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2015(04)
[2]豬傳染性胃腸炎病毒RT-PCR檢測(cè)方法的建立及臨床應(yīng)用[J]. 王黎,李碧,周遠(yuǎn)成,朱玲,徐志文,郭萬(wàn)柱.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(02)
[3]豬傳染性胃腸炎病毒S蛋白D位點(diǎn)單克隆抗體的制備和鑒定[J]. 姜新鵬,喬薪瑗,唐麗杰,葛俊偉,姜艷平,崔文,李一經(jīng).  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2013(07)
[4]豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)福建分離株核衣殼蛋白基因(N)的克隆與表達(dá)分析[J]. 王劭,朱小麗,朱曉琳,陳少鶯,林鋒強(qiáng),陳仕龍,程曉霞,李兆龍,江斌.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2013(01)
[5]豬傳染性胃腸炎診斷技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 楊金生,劉云志,柴方紅,黃海楠,任科研.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2012(05)
[6]豬傳染性胃腸炎病毒福建株M基因的克隆與生物信息學(xué)分析[J]. 朱曉琳,王劭,陳少鶯,林鋒強(qiáng),程曉霞,陳仕龍,朱小麗,李兆龍.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2011(06)
[7]豬傳染性胃腸炎病毒陜西株的分離鑒定[J]. 丁利,陳光達(dá),許信剛,童德文.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2011(10)
[8]豬傳染性胃腸炎診斷方法研究與進(jìn)展[J]. 羅小華.  福建畜牧獸醫(yī). 2011(04)
[9]豬流行性腹瀉病毒N基因的克隆及原核表達(dá)[J]. 楊巍,李廣興,孟凡丹,王鑫,任曉峰.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(06)
[10]豬傳染性胃腸炎病毒分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 葛晨霞,王龍濤,馬磊,胡桂學(xué).  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2010(12)

碩士論文
[1]豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)核酸疫苗免疫效力研究[D]. 孟凡丹.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉快速診斷方法的建立及S基因的表達(dá)[D]. 劉鄧.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[3]小鼠抗蛋清提取物單克隆抗體的制備與初步鑒定[D]. 許靜.南昌大學(xué) 2007



本文編號(hào)：2916336