發(fā)布時(shí)間：2020-12-09 04:50

　　肝片形吸蟲�。‵ascioliasis hepatica）是一種全球性分布的寄生蟲疾病。該病是造成反芻動物（如牛羊）發(fā)病和死亡的主要原因,季節(jié)性發(fā)病,對反芻動物危害嚴(yán)重。常規(guī)的糞便檢查方法只能檢出發(fā)育成熟的蟲體排出的蟲卵,不能起到早期診斷的作用,建立早期診斷方法早期準(zhǔn)確診斷是有效的控制該病的發(fā)生和蔓延的重要手段。因此,本試驗(yàn)成功克隆了肝片形吸蟲組織蛋白酶L（Fh Cat L）、肝片形吸蟲谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（Fh GST）和肝片形吸蟲絲氨酸蛋白酶抑制劑（Fh SPI）基因,并制備成重組蛋白,建立間接ELISA診斷方法,為肝片形吸蟲病的有效防治奠定基礎(chǔ)。本試驗(yàn)根據(jù)GenBank上發(fā)表的肝片形吸蟲組織蛋白酶L（Fh Cat L）、肝片形吸蟲谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（Fh GST）和肝片形吸蟲絲氨酸蛋白酶（Fh SPI）基因序列,設(shè)計(jì)合成了引物,提取肝片形吸蟲成蟲總RNA,通過PCR方法擴(kuò)增獲得目的基因。將獲得的目的基因與克隆載體pMD18-T連接,經(jīng)雙酶切、PCR及測序鑒定正確后,將鑒定正確目的片段與表達(dá)載體pET-30a連接,經(jīng)雙酶切測序鑒定正確后,用IPTG對目的蛋白進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

質(zhì)粒pMD18-T-FhCatL測序結(jié)果

圖 3-4 質(zhì)粒 pMD18-T-GST 測序結(jié)果Fig 3-4 Plasmid pMD18-T-GST sequencing results粒 pMD18-T-Fh SPI 測序結(jié)果的 SPI 基因測序結(jié)果與 GenBank 中公布的肝片形吸蟲 SPI 基因序列（A44.1）進(jìn)行比對。結(jié)果如圖 3-5 顯示：氨基酸序列同源性為 99.60%。圖 3-5 質(zhì)粒 pMD18-T-SPI 測序結(jié)果Fig 3-5 Plasmid pMD18-T-SPI sequencing resultsat L、Fh GST 和 Fh SPI 基因表達(dá)載體的鑒定

圖 3-5 質(zhì)粒 pMD18-T-SPI 測序結(jié)果Fig 3-5 Plasmid pMD18-T-SPI sequencing resultsL、Fh GST 和 Fh SPI 基因表達(dá)載體的鑒定 L、Fh GST 和 Fh SPI 重組表達(dá)載體的雙酶切鑒定體經(jīng) BamHI 和 HindIII 雙酶切，結(jié)果切出大小為 5000bp 的表達(dá)載 和 1200bp 兩個(gè)目的條帶，與預(yù)期結(jié)果相符，見圖 3-6。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]小鼠模型感染大片形吸蟲研究平臺初探[D]. 全琛宇.廣西大學(xué) 2015
[2]肝片吸蟲保護(hù)性抗原基因FH3轉(zhuǎn)基因苜�？墒骋呙绯醪窖芯縖D]. 黎萬奎.四川大學(xué) 2003



本文編號：2906304