細胞穿膜肽TAT介導(dǎo)豬繁殖與呼吸綜合征病毒Nsp9納米抗體Nb6抗病毒感染的研究
發(fā)布時間：2020-12-03 22:08
豬繁殖與呼吸綜合癥（PRRS）是一種以豬繁殖障礙和呼吸疾病為特征的病毒性傳染病,是目前造成全球養(yǎng)豬業(yè)巨大經(jīng)濟損失的重要傳染病之一。該病由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起。PRRSV以高變性、免疫抑制、持續(xù)性感染及抗體依賴性增強為特征,現(xiàn)有疫苗的群體保護力較低,尚無有效的抗病毒藥物。PRRSV非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp9是RNA依賴的RNA聚合酶,在不同毒株間高度保守,被認為是抗PRRSV藥物的一個重要靶標。在先前的研究中,本實驗室成功制備出一株P(guān)RRSV Nsp9特異性納米抗體Nb6,并且證明細胞內(nèi)表達的Nb6可以顯著抑制PRRSV在MARC-145細胞中的復(fù)制。然而,由于納米抗體不能有效穿過細胞膜,因此不能進入細胞達到抗病毒的作用。因此,制備安全、有效和無細胞毒性的細胞內(nèi)遞送系統(tǒng)對于提高Nb6的抗病毒活性至關(guān)重要。細胞穿透肽（cell penetrating peptides,CPPs）是一類含有約5-30個氨基酸的短肽,可以通過直接易位或內(nèi)吞作用等方式進入細胞內(nèi),且不會引起細胞毒性。目前,CPPs已經(jīng)被用作向細胞內(nèi)遞送各種貨物的工具,例如質(zhì)粒DNA,siRNA,蛋白質(zhì),病毒,成像劑和...
【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：106 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
PRRSV結(jié)構(gòu)圖（引自(Dokland,2010;MusicandGagnon,2010)）
第一章 文獻綜述1996)，Nsp10 是含有鋅指基序的解旋酶(Bautista et al., 2002; Seybert et al., 2005; Seybertet al., 2000)，Nsp11 是鳥苷酸特異性核酸內(nèi)切酶(Nedialkova et al., 2009)。目前對于 pp1ab中其它非結(jié)構(gòu)蛋白（Nsp5-8、Nsp12）的功能及結(jié)構(gòu)都尚不清楚，還需進一步的研究。PRRSV 非結(jié)構(gòu)蛋白 Nsp9 與宿主細胞蛋白共同組裝成病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄復(fù)合體（replicationand transcription complex, RTC），參與病毒 RNA 的復(fù)制及亞基因組 mRNA 的轉(zhuǎn)錄與翻譯。同時，Nan 等人發(fā)現(xiàn) PRRSV其它非結(jié)構(gòu)蛋白與 Nsp9 之間發(fā)生互作，形成了復(fù)雜的互作網(wǎng)絡(luò)(Nan et al., 2018)，這可能為 RTC 形成和功能的研究提供了理論基礎(chǔ)。
人發(fā)現(xiàn)了一種由 Gp5 的亞基因組 mRNA 編碼的膜錨定蛋白，并證實該 Gp5a 蛋白作為次要結(jié)構(gòu)蛋白被組裝到病毒顆粒中，并且在 PRRSV復(fù)制中至關(guān)重要(Firth et al., 2011;Johnson et al., 2011; Sun et al., 2013)。此外，Kappes 等人研究發(fā)現(xiàn)非結(jié)構(gòu)蛋白 Nsp2 能夠組裝到多種PRRSV毒株的病毒顆粒中，但其在病毒粒子中的作用尚不清楚(Kappes etal., 2013)。1.1.3 PRRSV 感染與機體免疫應(yīng)答1.1.3.1 PRRSV 感染相關(guān)的受體蛋白豬是 PRRSV目前已知的唯一天然宿主，并且 PRRSV感染嚴格靶向于單核巨噬細胞。PRRSV通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進入細胞，內(nèi)體酸化膜融合之后，病毒基因組被釋放到細胞質(zhì)中，然后開始它的復(fù)制。研究表明，PRRSV進入細胞由許多宿主細胞受體或因子介導(dǎo)，包括硫酸乙酰肝素(Delputte et al., 2002)、波形蛋白(Kim et al., 2006)、CD151(Wu et al., 2014)、豬 CD163(Guo et al., 2014)、唾液酸黏附蛋白（CD169）(Delputteet al., 2007)、DC-SIGN（CD209）(Huang et al., 2009; Pineyro et al., 2016)和 M YH9(Gao etal., 2016)等（圖 1-3）。通過對豬巨噬細胞 cDNA 文庫受體功能的篩選，發(fā)現(xiàn) CD163（清道夫受體半胱氨酸家族成員）是 PRRSV起始感染的關(guān)鍵因素。一些 PRRSV非易感細
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccines: Immunogenicity, efficacy and safety aspects[J]. Wasin Charerntantanakul. World Journal of Virology. 2012(01)
本文編號：2896569
【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：106 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
PRRSV結(jié)構(gòu)圖（引自(Dokland,2010;MusicandGagnon,2010)）
第一章 文獻綜述1996)，Nsp10 是含有鋅指基序的解旋酶(Bautista et al., 2002; Seybert et al., 2005; Seybertet al., 2000)，Nsp11 是鳥苷酸特異性核酸內(nèi)切酶(Nedialkova et al., 2009)。目前對于 pp1ab中其它非結(jié)構(gòu)蛋白（Nsp5-8、Nsp12）的功能及結(jié)構(gòu)都尚不清楚，還需進一步的研究。PRRSV 非結(jié)構(gòu)蛋白 Nsp9 與宿主細胞蛋白共同組裝成病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄復(fù)合體（replicationand transcription complex, RTC），參與病毒 RNA 的復(fù)制及亞基因組 mRNA 的轉(zhuǎn)錄與翻譯。同時，Nan 等人發(fā)現(xiàn) PRRSV其它非結(jié)構(gòu)蛋白與 Nsp9 之間發(fā)生互作，形成了復(fù)雜的互作網(wǎng)絡(luò)(Nan et al., 2018)，這可能為 RTC 形成和功能的研究提供了理論基礎(chǔ)。
人發(fā)現(xiàn)了一種由 Gp5 的亞基因組 mRNA 編碼的膜錨定蛋白，并證實該 Gp5a 蛋白作為次要結(jié)構(gòu)蛋白被組裝到病毒顆粒中，并且在 PRRSV復(fù)制中至關(guān)重要(Firth et al., 2011;Johnson et al., 2011; Sun et al., 2013)。此外，Kappes 等人研究發(fā)現(xiàn)非結(jié)構(gòu)蛋白 Nsp2 能夠組裝到多種PRRSV毒株的病毒顆粒中，但其在病毒粒子中的作用尚不清楚(Kappes etal., 2013)。1.1.3 PRRSV 感染與機體免疫應(yīng)答1.1.3.1 PRRSV 感染相關(guān)的受體蛋白豬是 PRRSV目前已知的唯一天然宿主，并且 PRRSV感染嚴格靶向于單核巨噬細胞。PRRSV通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進入細胞，內(nèi)體酸化膜融合之后，病毒基因組被釋放到細胞質(zhì)中，然后開始它的復(fù)制。研究表明，PRRSV進入細胞由許多宿主細胞受體或因子介導(dǎo)，包括硫酸乙酰肝素(Delputte et al., 2002)、波形蛋白(Kim et al., 2006)、CD151(Wu et al., 2014)、豬 CD163(Guo et al., 2014)、唾液酸黏附蛋白（CD169）(Delputteet al., 2007)、DC-SIGN（CD209）(Huang et al., 2009; Pineyro et al., 2016)和 M YH9(Gao etal., 2016)等（圖 1-3）。通過對豬巨噬細胞 cDNA 文庫受體功能的篩選，發(fā)現(xiàn) CD163（清道夫受體半胱氨酸家族成員）是 PRRSV起始感染的關(guān)鍵因素。一些 PRRSV非易感細
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccines: Immunogenicity, efficacy and safety aspects[J]. Wasin Charerntantanakul. World Journal of Virology. 2012(01)
本文編號：2896569
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