發(fā)布時間：2020-10-25 19:28

　　 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的作用最先被人們廣泛地認(rèn)知,而其在哺乳動物其他組織器官的作用和功能還有待于進(jìn)一步的探索。而關(guān)于BDNF對雄性生殖生理的影響的研究卻十分有限,特別是BDNF對雄性睪酮合成的影響還未見報道。本試驗?zāi)康脑谟谔剿鰾DNF是否對雄性動物睪丸中類固醇激素的合成存在調(diào)節(jié)的作用,若存在調(diào)節(jié)作用,并試圖進(jìn)一步闡明其內(nèi)在的機(jī)理。我們的研究發(fā)現(xiàn),添加外源的BDNF能夠上調(diào)類固醇激素合成相關(guān)的基因的表達(dá),從而促進(jìn)類固醇激素的合成,這些基因主要包括Steroidogenic acute regμLatory protein(Star),3b-hydroxysteroid dehydrogenase(Hsd3b1)和Cytochrome P450 side-chain cleavage enzyme(Cyp11a1)。結(jié)果顯示,處理之后上清中的睪酮的含量顯著地升高(p0.05),而Star,Hsd3b1,Cyp11a1的mRNA水平顯著升高(p0.05),Star和Cyp11a1蛋白的水平顯著升高(p0.05)。為了進(jìn)一步印證BDNF的作用,本試驗用RNA干擾的方法,瞬時地將內(nèi)源的BDNF基因進(jìn)行敲降,發(fā)現(xiàn)BDNF敲降之后,首先顯著地降低上清中的睪酮的分泌水平(p0.05),其次,顯著地降低了類固醇激素合成相關(guān)基因的表達(dá),結(jié)果顯示:BDNF,Star,Hsd3b1,Cyp11a1的mRNA水平顯著性降低(p0.05),Star以及Cyp11a1蛋白的水平也顯著性降低(p0.05)。為了闡明BDNF對類固醇激素合成調(diào)控的作用機(jī)理,我們在外源的BDNF處理和干擾掉內(nèi)源的BDNF基因之后,均分別檢測了MEK-ERK1/2通路的磷酸化的水平變化,通過western boltting技術(shù)檢測了關(guān)鍵蛋白ERK1/2的磷酸化水平,結(jié)果顯示,BDNF蛋白處理24小時之后,ERK1/2的磷酸化水平顯著地上升(p0.05)。而干擾掉內(nèi)源的BDNF基因之后,ERK1/2的磷酸化水平又顯著地下降(p0.05)。為了進(jìn)一步印證MEK-ERK1/2通路的激活狀態(tài),我們用MEK通路特異性阻斷劑PD98059處理了TM3細(xì)胞,結(jié)果表明,處理之后,首先ERK1/2的磷酸化水平顯著地下降(p0.05),而上清中的睪酮含量顯著地降低(p0.05)。其次,Star,Hsd3b1,Cyp11a1的mRNA水平顯著性降低(p0.05),而Star和Cyp11a1蛋白的水平也顯著性降低(p0.05)。添加外源的BDNF蛋白的試驗中,證明BDNF有促進(jìn)睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮合成的作用,而敲降內(nèi)源的BDNF基因的試驗證明,BDNF能夠作為一種旁分泌因子對睪酮的合成進(jìn)行調(diào)節(jié)。而ERK1/2通路是參與BDNF發(fā)揮其調(diào)節(jié)作用的一條通路。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S814.1
【文章目錄】：
中文摘要
abstract
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的研究進(jìn)展
        1.1 BDNF研究進(jìn)展
        1.2 BDNF在神經(jīng)系統(tǒng)中的功能
        1.3 BDNF在其他組織器官中的功能
    第二章 Leydig cells 的生理及功能
        2.1 Leydig cells 細(xì)胞的來源
        2.2 Leydig cells 的主要功能
        2.3 Leydig cells 的功能調(diào)節(jié)
    第三章 睪酮的合成及功能
        3.1 睪酮的合成
        3.2 睪酮的合成調(diào)控
        3.3 睪酮的功能
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 BDNF對小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞系TM3增殖的影響
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
        1.3 試驗結(jié)果
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第二章 BDNF對小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞系TM3睪酮分泌的影響
        2.1 添加BDNF對TM3細(xì)胞睪酮分泌水平的影響
        2.2 添加BDNF對TM3細(xì)胞StARCYP11A13β-HSD表達(dá)的影響
        2.3 敲降Bdnf基因?qū)M3睪酮分泌水平的影響
        2.4 敲降Bdnf基因?qū)M3StARCYP11A13β-HSD表達(dá)的影響
        2.5 討論
        2.6 小結(jié)
    第三章 BDNF調(diào)控小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞系TM3增殖和睪酮合成的機(jī)理研究
        3.1 添加BDNF對MEK-ERK1/2通路激活的影響
        3.2 敲降Bdnf基因?qū)EK-ERK1/2通路激活的影響
        3.3 阻斷MEK-ERK1/2通路對TM3睪酮分泌的影響
        3.4 阻斷MEK-ERK1/2通路對TM3StARCYP11A13β-HSD表達(dá)的影響
        3.5 討論
        3.6 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡介
作者簡介及在學(xué)期間的研究成果
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2855862