發(fā)布時間：2020-10-24 09:38

　　 由于奶牛自身生理因素或外界條件性病原微生物刺激引發(fā)的奶牛乳腺炎,是一種奶牛乳腺綜合性疾病,也是導致奶牛養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟損失最為慘重的一種疾病。奶牛乳腺炎嚴重影響牛奶的質(zhì)量和產(chǎn)量,并可導致乳腺泌乳機能受損甚至完全喪失。臨床上誘發(fā)奶牛乳腺炎最為常見的兩種細菌為大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。大腸桿菌細胞壁關鍵組成成分為脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),可誘發(fā)機體產(chǎn)生炎癥反應;脂磷壁酸(Lipoteichoic acid,LTA)是金黃色葡萄球菌細胞壁的關鍵組成成分,可導致宿主產(chǎn)生不同的免疫應答。單核細胞趨化蛋白誘導蛋白1(Monocyte chemoattractant protein-induced protein 1,MCPIP1)作為一種轉(zhuǎn)錄因子在機體免疫應答過程中發(fā)揮重要作用。然而,MCPIP1是否參與LPS和LTA誘導的奶牛乳腺上皮細胞炎性應答過程尚未見報道。在本實驗首先通過實時熒光定量PCR和蛋白免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)MCPIP1在奶牛炎性乳腺組織中基因和蛋白表達水平顯著高于奶牛正常乳腺組織。在LPS和LTA分別侵染永生化奶牛乳腺上皮細胞系(MAC-T)建立的體外奶牛乳腺炎細胞模型中,MCPIP1基因和蛋白表達水平明顯高于未處理的對照組細胞,與乳腺組織中表達結(jié)果一致,表明MCPIP1參與奶牛乳腺上皮細胞炎性應答過程。為了進一步研究MCPIP1在LPS和LTA誘導奶牛乳腺上皮細胞免疫應答中發(fā)揮作用的機制,本實驗通過插入含有MCPIP1序列的慢病毒載體建立穩(wěn)定過表達MCPIP1的MAC-T細胞,研究MCPIP1對MAC-T細胞在炎癥應答過程中細胞炎性因子分泌、細胞增殖、凋亡、DNA損傷和氧化損傷等影響。實驗結(jié)果顯示MCPIP1抑制由LPS和LTA誘導的炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8等分泌水平;增強LPS和LTA對MAC-T細胞增殖的抑制作用以及促進LPS和LTA所誘導的氧化損傷和DNA損傷。綜上所述,MCPIP1參與LPS和LTA誘導的奶牛乳腺上皮細胞氧化損傷和炎性應答過程,這一研究結(jié)果為奶牛乳腺炎病理機制研究提供了新研究思路。
【學位單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S858.23
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 奶牛乳腺炎研究進展
        1.1.1 奶牛乳腺炎概述
        1.1.2 奶牛乳腺炎發(fā)病機理
        1.1.3 奶牛乳腺炎流行與危害
        1.1.4 奶牛乳腺炎治療
        1.1.5 奶牛乳腺炎預防
    1.2 奶牛乳腺上皮細胞免疫機理
    1.3 奶牛乳腺上皮細胞在乳腺免疫應答中的作用
    1.4 MCPIP1 研究進展
        1.4.1 MCPIP1 生物學特征
        1.4.2 MCPIP1 基因相關功能
        1.4.3 MCPIP1 基因表達調(diào)控
        1.4.4 MCPIP1 研究現(xiàn)狀
    1.5 研究目的和意義
第二章 MCPIP1在LPS和 LTA誘導的奶牛乳腺上皮細胞氧化損傷和炎性應答中的作用研究
    2.1 材料
        2.1.1 奶牛乳腺組織和奶牛乳腺上皮細胞系
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 儀器設備
    2.2 方法
        2.2.1 主要溶液配制
        2.2.2 細胞培養(yǎng)
        2.2.3 炎性細胞模型建立
        2.2.4 實時熒光定量PCR
        2.2.5 蛋白免疫印跡技術
        2.2.6單細胞凝膠電泳彗星實驗
        2.2.7 超氧化物歧化酶活性檢測
        2.2.8 細胞增殖
        2.2.9 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.10 統(tǒng)計學分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 MCPIP1 在奶牛乳腺組織和乳腺上皮細胞中的表達水平
        2.3.2 穩(wěn)定高表達MCPIP1 的奶牛乳腺上皮細胞系建立
        2.3.3 MCPIP1 抑制LPS或 LTA誘導的炎性細胞因子表達
        2.3.4 MCPIP1 促進LPS和 LTA所誘導乳腺上皮細胞的氧化損傷
        2.3.5 MCPIP1 增加LPS和 LTA所誘導乳腺上皮細胞的DNA損傷
        2.3.6 MCPIP1 增強LPS和 LTA對 MAC-T細胞增殖的抑制作用
    2.4 討論
全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介

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本文編號：2854300