在過(guò)去的20年里中國(guó)荷斯坦奶牛在選擇強(qiáng)度的加大下,單產(chǎn)水平急劇攀升而繁殖力緩慢下降,與其他奶業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家繁殖力發(fā)展規(guī)律基本一致,高產(chǎn)奶牛在生理和代謝方面都發(fā)生了極大變化來(lái)適應(yīng)高產(chǎn)的生產(chǎn)環(huán)境,一般在規(guī)模奶牛場(chǎng)受精率在90%左右,而產(chǎn)犢率在60%左右,在生產(chǎn)中存在30%左右的胚胎丟失或胎兒死亡,因此,早期隱性流產(chǎn)是影響繁殖力的重要因素,基于上述背景,本研究開(kāi)展了以下方面的工作:1.荷斯坦青年母牛孕酮分泌范型建立與早期隱性流產(chǎn)研究隨機(jī)選取100頭13月齡-14月齡中國(guó)荷斯坦青年奶牛作為研究對(duì)象,配種當(dāng)天計(jì)作0天,其后每隔3天尾跟采血1次,直到配種后60天,同時(shí)在30天與60天B超妊娠檢查時(shí)做好每頭牛的繁殖記錄,每頭牛做好標(biāo)記,采血后立即離心取血漿進(jìn)行孕酮測(cè)定,孕酮測(cè)定采用放射免疫法測(cè)定,數(shù)據(jù)分析采用SAS軟件單因素方差分析,結(jié)果顯示了正常妊娠組56頭牛孕酮分泌范型:第 3 天為 1.255ng/mL±0.554 ng/mL,第 6 天 2.973 ng/mL±1.241 ng/mL,第9天4.237ng/mL±1.590ng/mL,第3天到第9天孕酮水平急劇升高,第21天5.957 ng/mL±2.524 ng/mL,大于2ng/mL,隨后孕酮水平保持在6ng/mL,符合早期胚胎發(fā)育所需的組織營(yíng)養(yǎng)特別是孕酮的需求變化,根據(jù)孕酮分泌范型結(jié)合母牛個(gè)體孕酮曲線急劇下降節(jié)點(diǎn)判定早期隱性流產(chǎn)組牛17頭:第18天3頭,第21天3頭,第33天3頭,第39天3頭;第45天2頭,第51天3頭;60天受胎率為70%,早期隱性流產(chǎn)率17%。2.荷斯坦青年母牛早期隱性流產(chǎn)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與候選基因篩選選取青年荷斯坦母牛早期隱性流產(chǎn)組第18天、第21天、第33天、第39天和第51天各3頭,相對(duì)應(yīng)天數(shù)正常發(fā)育組各3頭為對(duì)照,采用RNA-Seq技術(shù)對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序研究,結(jié)果顯示:第18天發(fā)現(xiàn)32個(gè)差異表達(dá)基因,其中15個(gè)基因上調(diào),17個(gè)基因下調(diào);第21天發(fā)現(xiàn)175個(gè)差異表達(dá)基因,102個(gè)上調(diào),74個(gè)下調(diào);第33天發(fā)現(xiàn)5個(gè)差異表達(dá)基因,1個(gè)基因上調(diào),4個(gè)下調(diào);第39天發(fā)現(xiàn)10個(gè)差異表達(dá)基因,2個(gè)上調(diào),8個(gè)下調(diào):第51天發(fā)現(xiàn)2個(gè)上調(diào)基因,0個(gè)下調(diào)基因。根據(jù)生物信息學(xué)相關(guān)分析共篩選出6個(gè)早期隱性流產(chǎn)相關(guān)候選基因:p38、Fas、CDH2、VCAM1、MMP14、EEF1A1。3.荷斯坦青年母牛繁殖力生物信息學(xué)分析通過(guò)生物信息學(xué)研究發(fā)現(xiàn):p38和Fas可能調(diào)控了黃體細(xì)胞凋亡;CDH2基因表達(dá)產(chǎn)物作為鈣離子依賴的細(xì)胞粘附素家族一員,可能在調(diào)節(jié)胚胎神經(jīng)管的形成起到重要作用,基因的下調(diào)導(dǎo)致早期胚胎死亡;VCAM1基因表達(dá)的糖蛋白分子,可能介導(dǎo)了早期胚胎與子宮內(nèi)膜的粘附作用;MMP14基因表達(dá)一種鋅依賴型蛋白水解酶,在早期胚胎侵潤(rùn)子宮內(nèi)膜起到關(guān)鍵作用,EEF1A1是真核生物翻譯延長(zhǎng)因子三者共同作用完成早期胚胎的附植準(zhǔn)備工作。
【學(xué)位單位】：寧夏大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S823.3
【部分圖文】：

圖１－丨牛９？期胚胎發(fā)育過(guò)程??Ｆｉｇｌ－ｌ?Ｅａｒｌｙ?ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ｏｆ?ｃａｔｔｌｅ??卵裂牛等哺乳類卵由卵巢釋放后，受精發(fā)生在輸卵管靠近卵巢一端的壺腹部，牛等哺??乳類動(dòng)物較其他類動(dòng)物卵裂較為緩慢，１２－１４小時(shí)卵裂１次，其卵裂球排列方式較為獨(dú)特，??第１次卵裂為經(jīng)線卵裂，第２次卵裂？個(gè)卵裂球?yàn)榫暰�卵裂，另一個(gè)為經(jīng)線卵裂。??桑葚胚階段牛等哺乳類在８細(xì)胞階段卵裂球細(xì)胞之間存在足夠的空間呈現(xiàn)松散狀態(tài)，??但在第３次卵裂后它們突然擠在一起，形成一個(gè)緊密的細(xì)胞球體，緊密化的１６個(gè)細(xì)胞期被??稱為桑椹胚階段。緊密化后位于外層的細(xì)胞將形成滋養(yǎng)層細(xì)胞，內(nèi)部的細(xì)胞發(fā)育成胚胎。??囊胚階段桑椹胚繼續(xù)細(xì)胞分裂，形成？個(gè)中空的細(xì)胞球，這個(gè)具有空腔的胚胎叫做囊??胚，在囊胚內(nèi)遷向子宮過(guò)程中，囊胚不斷膨脹，透明帶起到防止囊胚與輸卵管壁粘著的作用，??從而防止異位妊娠的發(fā)生，牛在受精后第４天到達(dá)子宮，開(kāi)始進(jìn)行附植前準(zhǔn)備工作；同時(shí)隨??著細(xì)胞分裂，囊胚發(fā)生原腸作用，期間由于細(xì)胞的之間的位置發(fā)生巨大變動(dòng)，最終形成了三??層（外胚層、中胚層、內(nèi)胚層）結(jié)構(gòu)的胚胎結(jié)構(gòu)。??１．２．２影響早期隱性流產(chǎn)的因素??１．２．２．１黃體功能不足??

，，相比優(yōu)勢(shì)卵泡１４．５±０．２ｍｍ，也可能減少了胚胎識(shí)別的妊娠蛋白ｂｌＦＮ－ｔ（ｂＴＰ）有關(guān)。??１．２．２．２．母胎識(shí)別及妊娠??在母胎界面的識(shí)別方面，干擾素一ｔａｕ，起到關(guān)鍵的作用Ｐ１，在早期胚胎發(fā)育方面，黃淋巴系統(tǒng)重建，母體免疫系統(tǒng)不僅要從子宮與孕體上接受胚胎，也要從孕體與母體全身來(lái)受胚胎，母體在外周免疫細(xì)胞的作用下，將受孕信息傳遞到各個(gè)器官，包括子宮和母體的管，準(zhǔn)備胚胎發(fā)育附植，早期懷孕黃體的淋巴系統(tǒng)的重建對(duì)母體的免疫信號(hào)起到了關(guān)鍵作母胎界面方面，胚胎信號(hào)現(xiàn)在子宮內(nèi)發(fā)出信號(hào)說(shuō)明自己的存在，結(jié)果是阻止了?ＰＧ２ａ的泌，在反芻類，牛上面是ｂｌＦＮ－ｔ（ｂＴＰ），在胚胎發(fā)育過(guò)程的第１５天由滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌??高效的阻止ＰＧ２ａ的分泌同時(shí)需要胚胎占據(jù)同側(cè)的子宮角的黃體作用，在胚胎發(fā)育的第１７變化較大，如果沒(méi)有足夠的ｂｌＦＮ－ｔ（ｂＴＰ）分泌來(lái)防止黃體的退化，胚胎發(fā)育將遲緩。??ｈ可能通過(guò)促進(jìn)ｂｌＦＮ－ｉ（ｂＴＰ）的分泌來(lái)維持妊娠，奶牛在胚胎識(shí)別期血漿高水平的有利于生產(chǎn)高質(zhì)量的胚胎ｔ３５％高水平的ｂｌＦＮ－ｉ（ｂＴＰ）可以加速黃體的生產(chǎn)和阻止了?ＫＪ２？的放，大量的ｂｉＦＮ－ｉ（ｂＴＰ）在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中也被發(fā)現(xiàn)，同樣是維持妊娠的作用，作用理基本是通過(guò)減少了雌激素的受體數(shù)量，從而減少了?ＰＧ２ａ的分泌〖３７３８］，?ｂｌＦＮ－ｔ（ｂＴＰ）在子上皮細(xì)胞阻止催產(chǎn)素的信號(hào)傳導(dǎo)，在磷脂酶、環(huán)氧化酶２和ＰＧＦ的作用都受到了相應(yīng)的響，這些酶都是磷脂合成花生四烯酸重要作用，而花生四烯酸是合成ＰＧ２ａ的前體物質(zhì)［＃４３??ｒＴ．－?？ＣＬｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ??

與ＧＷＡＳ技術(shù)將產(chǎn)后發(fā)情時(shí)間和初情期的月齡定位到５號(hào)和１４號(hào)染色體上；奶牛方面，??Ｈｏｇｌｕｎｄ?［ＩＤ５】２００９年報(bào)道與奶牛繁殖力有關(guān)的ＱＴＬ在染色體丨，２，７，９，丨０．２４，２６上面。??ＭａｒｉｎａｌＷ２０ｌ３年也進(jìn)行了繁殖性狀的基因定位如圖１－３。??１?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２?１３?１４?１５?■?Ａｇｅ?ａｔ?ｐｕｂｅｒｔｙ??ｊ．?Ｉ＊?？?？?＊?＊?＊?■?Ｃａｌｖｉｎｇ?ｅａｓｅ?ａｎｄ?ｃａｌｆ?ｐｅｒｆｏｎｎａｎｃｅ??？?？?Ｉ。?？?■?Ｊ?：?寒?裊。Ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ?ｒａｔｅ??？?２?？?ｅ?Ａ?？＊??１°?＃?Ｉ?ｒｓ＊?■?｜?｜?Ｄａｕｇｈｔｅｒ?ｐｒｅｇｎａｎｃｙ?ｒａｔｅ??■?，?Ｄ?〇■?ｃ?□?Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ??！?？?Ｉ?〇??？?？?｜?｜?Ｆｉｒｓ！?ｓｅｒｖｉｃｅ?ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ??？？?Ｃ?＊?°?；?■?Ｇｅｓｔａｔｉｏｎ?ｌｅｎｇｔｈ??ｎｕ?Ｅ＊?－?＃?：??。＿?丨?？?？?■?Ｈｅｉｆｅｒ?ｐｒｅｇｎａｎｃｙ??１６?１７?１８?１９?２０?２１?２２?２３?２４?２５?２６?２７?２８?２９?Ｘ?．ｄａｓ．?＾ｎｉｃｃ??％?□?Ｉｎｔｅｒｖａｌ?ｔｏ?ｆｉｒｓｔ?ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ?ａｆｔｅｒ?ｃａｌｖｉｎｇ??？?：?？?？?｜?Ｎｏｎ－ｒｅｔｕｍ?ｔｏ?ｅｓｔｒｏｕｓ?ｒａｔｅ??Ｏ?ｏ?？?？??％
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本文編號(hào)：2839686