為了解廣西地區(qū)犬細(xì)小病毒病的流行病學(xué)情況,及時(shí)發(fā)現(xiàn)和掌握疫情動(dòng)態(tài),現(xiàn)將2015年1月1日至2017年12月31日期間,在廣西地區(qū)的11861例犬傳染性病毒病(以犬瘟熱病毒(canine distemper virus,CDV)、犬細(xì)小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬冠狀病毒(canine coronavirus,CCV)為主)及其中7107例犬細(xì)小病毒病單一感染和犬細(xì)小病毒病混合感染的門診記錄情況進(jìn)行調(diào)查分析。結(jié)果表明:犬細(xì)小病毒感染存在性別、年齡、品種、季節(jié)和免疫狀況等方面的差異,其中公犬感染率高,2-3月齡幼犬感染率高,純種犬發(fā)病率高,3-5月份犬發(fā)病率高,未免疫接種的犬感染率高。本實(shí)驗(yàn)建立了快速檢測(cè)犬細(xì)小病毒的PCR方法,最低能檢測(cè)出5-6×6.1342ng/μL的病毒DNA。隨機(jī)采集2016～2017年來(lái)自廣西地區(qū)的120只患病動(dòng)物應(yīng)用膠體金免疫層析法確診為犬細(xì)小病毒的臨床病料,應(yīng)用已建立的PCR檢測(cè)方法對(duì)其進(jìn)行二次檢測(cè),120只患病動(dòng)物的病料均為陽(yáng)性,檢出率為100%。PCR方法檢測(cè)CPV具有更高的靈敏性,而膠體金免疫層析法在臨床操作上更加快捷簡(jiǎn)便。通過(guò)對(duì)廣西不同地區(qū)的120份臨床病料的CPV VP2全基因測(cè)序結(jié)果進(jìn)行CPV亞型分析,發(fā)現(xiàn)CPV-2c亞型占59.17%(71/120),CPV--2亞型占25.83%(31/120),CPV-2b 亞型占 15.00%(18/120),表明 2016～2017年廣西地區(qū)的CPV主要流行的亞型為CPV-2c和CPV-2a,而CPV-2b的比例較低,無(wú)CPV-2亞型,這也是廣西地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)CPV-2c;分離株之間以及與參考毒株之間的核苷酸序列、氨基酸序列的同源性都較高。通過(guò)對(duì)從PCR鑒定VP2全基因?yàn)殛?yáng)性的120份樣品(糞便)DNA隨機(jī)挑選出10份樣品進(jìn)行CPV全基因測(cè)序,從測(cè)序結(jié)果可知全基因的核苷酸同源性較高,但氨基酸同源性有高有低,而VP2的核苷酸及氨基酸的同源性都較高,再結(jié)合臨床癥狀觀察可知,這10個(gè)樣品所對(duì)應(yīng)的病犬的臨床癥狀都符合犬細(xì)小病毒病的臨床癥狀,所以CPV起抗原決定簇作用的部位在VP2片段上,與報(bào)道相符合。綜上所述,廣西地區(qū)犬細(xì)小病毒病的分子流行病學(xué)調(diào)查及遺傳差異分析,為探討臨床免疫失敗的原因及有針對(duì)性地開發(fā)寵物用CPV疫苗奠定了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S858.292
【部分圖文】：

５７．０ｏＣ、５８．０°Ｃ、５９．０。0、６０．０0Ｃ的退火溫度中，均可擴(kuò)增出明顯的ＤＮＡ片段，且擴(kuò)增逡逑出來(lái)的ＤＮＡ片段值與期望值６９３ｂｐ相當(dāng)，最后通過(guò)從各方面因素考慮，選擇最終的退逡逑火溫度為５５．０°Ｃ邋（圖３－１）。逡逑Ｍ邋１邐２邐３邐４邐５邐６７８９邐１０逡逑＿＿邋Ｊｌ？■栜：１j#二逡逑２０００邋ｂｐ逡逑圖３－１邋ＰＣＲ檢測(cè)的最佳退火溫度逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｔｈｅ邋ｏｐｔｉｍｕｍ邋ａｎｎｅａｌｉｎｇ邋ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ邋ｆｏｒ邋ＰＣＲ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ逡逑Ｍ：邋ＤＬ２０００邋ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；邋１？１０為犬細(xì)小病毒ＤＮＡ的ＰＣＲ產(chǎn)物，退火溫度分別為５１．０°Ｃ、５２．０°Ｃ、逡逑５３．０。。、５４．０。0、５５．０°Ｃ、５６．０。0、５７．０°Ｃ、５８．０。。、５９．０。。、６０．０。0。逡逑３．３．Ｉ．２最適ＤＮＡ模板量的確立逡逑通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳顯示，觀察到在犬細(xì)小病毒（ＣＰＶ）ＤＮＡ模板的量分別為０．２ｐＬ、逡逑０＿４ｊｊＬ、０．６｜ｉＬ、０．８ｐＬ、ｌ＿０ｐＬ、１．２｜ｉＬ、１．４叫、１．６ｐＬ、１．８｜ｉＬ、２．0ｎＬ邋中，均可擴(kuò)增出明逡逑顯的ＤＮＡ片段，且擴(kuò)增出來(lái)的ＤＮＡ片段值與期望值６９３ｂｐ相當(dāng)，最后通過(guò)從各方面逡逑因素考慮

邐廣西地區(qū)犬細(xì)小病毒的分子流行病學(xué)調(diào)查研究逡逑Ｍ邋１２３４５６７８９邐１０逡逑圖３－２邋ＰＣＲ檢測(cè)的最佳ＤＮＡ模板量逡逑Ｆｉｇ．３－２邋Ｔｈｅ邋ｏｐｔｉｍａｌ邋ＤＮＡ邋ｔｅｍｐｌａｔｅ邋ａｍｏｕｎｔ邋ｆｏｒ邋ＰＣＲ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ逡逑Ｍ：邋ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；邋１？１０為犬細(xì)小病毒ＤＮＡ的ＰＣＲ產(chǎn)物，犬細(xì)小病毒ＤＮＡ模板的量分別逡逑為邋０．２ｊｉＬ、０．４ｊｉＬ、０．６｜ａＬ、０．８ｊｊＪＬ、ｌ．ＯｊｉＬ、１．２（ｉＬ、１．４｜ｉＬ、１．６ｊｉＬ、１．８｜ｉＬ、２．０｜ｉＬ。逡逑３．３．１．３最適引物量的確立逡逑通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳顯示，觀察到在上下游引物（ＧＸＰ－Ｆ１和ＧＸＰ－Ｒ１）的量分別逡逑為邋０．２ｐＬ、０．４｜ｉＬ、０．６（ｉＬ、０＿８｜ｉＬ、１．０（＿ｉＬ、１．２（ＪＬ、１．４ｊｉＬ、１．６（ｉＬ、１．８｜ｉＬ、２．０（ｉＬ邋中，均逡逑可擴(kuò)增出明顯的ＤＮＡ片段，且擴(kuò)增出來(lái)的ＤＮＡ片段值與期望值６９３ｂｐ相當(dāng)，最后通逡逑過(guò)從各方面因素考慮，選擇最終的引物量均為１．０邐（圖＞３）。逡逑Ｍ邋１邐２邐３邐４邐５邐６邐７邐８邐９邐１０逡逑＼邐、ｖ／邋＜Ｖ”；邐＞邋ｗ邋、邋Ｖ邐：邋，丫邋、？４逡逑＿＿焌嫇趣~杶朸~霉ｉ媝囊１嫇灥逡逑ｂｐ邐廣＇：逡逑圖３－３邋ＰＣＲ檢測(cè)的最佳引物量逡逑Ｆｉｇ．３－３邋Ｔｈｅ邋ｏｐｔｉｍｕｍ邋ｐｒｉｍｅｒ邋ｑｕａｎｔｉｔｙ邋ｆｏｒ邋ＰＣＲ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ逡逑Ｍ：邋ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；邋１？１０為犬細(xì)小病毒ＤＮＡ的ＰＣＲ產(chǎn)物

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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2833910