本文關鍵詞：Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑對鵝肝細胞脂質(zhì)沉積的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：機體內(nèi)脂質(zhì)代謝平衡被破壞,就會引起大量的的脂質(zhì)在肝臟內(nèi)沉積形成脂肪肝。Sirtl基因在脂質(zhì)代謝中起著重要的調(diào)控作用,但其具體調(diào)控機制還不明確；PI3K-Akt-mTOR信號通路參與調(diào)控糖脂代謝等新陳代謝活動,而其具體機理也是目前的研究熱點之一；兩者在脂質(zhì)調(diào)控中是否存在相互作用,目前鮮見報道,因此本試驗通過不同濃度的尼克酰胺(Nicotinamide)處理鵝原代肝細胞,檢測Sirt1和脂質(zhì)代謝關鍵因子的表達變化；然后在選出的最佳尼克酰胺濃度處理鵝原代肝細胞的基礎上,添加不同的PI3K-Akt-mTOR信號通路抑制劑LY294002、NVP-BEZ235、雷帕霉素(Rapamycin)處理培養(yǎng),檢測脂肪酸合成與氧化、VLDL的生成和分泌、PI3K-Akt-mTOR信號通路關鍵因子和Sirt1本身的表達變化,分析Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑調(diào)控脂質(zhì)代謝的機理。主要研究結果如下：1.不同濃度尼克酰胺處理鵝原代肝細胞,Sirtl的mRNA表達水平和蛋白濃度隨著尼克酰胺濃度升高而降低；尼克酰胺處理濃度為100μmol/L時,Sirt1蛋白濃度為對照組的51.50%;2.不同濃度尼克酰胺處理肝細胞,促進脂肪酸合成關鍵因子SREBP1、FAS、ACCa表達(P0.05),抑制脂肪酸氧化關鍵因子PPARα、PPARγ、ACOX1、CPT1的表達(P0.05),下調(diào)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運關鍵因子FoxO1、MTTP、DGAT1、DGAT2的表達水平(P0.05)；尼克酰胺處理也能增加胞內(nèi)TG含量(P0.05),減少VLDL和胞外TG含量(P0.05),誘導肝細胞內(nèi)脂滴增大增多、脂質(zhì)含量上升(P0.05),脂質(zhì)沉積增加;3.鵝肝細胞添加100μmol/L的尼克酰胺處理后,PI3K-Akt-mTOR信號通路關鍵因子P13K的表達被抑制(P0.05), mTOR表達被上調(diào)(P0.05), Akt1表達無顯著性變化(P0.05)；再添加通路抑制劑LY294002時,mTOR、Akt1表達被下調(diào),PI3K表達與尼克酰胺單獨處理無顯著性差異；而當再添加通路抑制劑Rapamycin時,mTOR、Akt表達降低,而PI3K表達較尼克酰胺單獨處理顯著升高；當在添加NVP-BEZ235雙重抑制信號通路時,Akt表達與對照組無顯著性差異,mTOR被下調(diào),PI3K表達較尼克酰胺單獨處理無顯著性差異。再添加NVP-BEZ235抑制劑時,Sirt1表達與尼克酰胺單獨處理無顯著性差異,而當再添加另外兩種通路抑制劑時,Sirtl表達顯著降低(P0.05)；4.最佳濃度100μmol/L的尼克酰胺處理鵝肝細胞,抑制Sirtl表達,導致脂肪酸合成關鍵因子表達增加；而添加通路抑制劑LY29002、NVP-BEZ235、Rapamycin時,脂肪酸合成關鍵因子表達被顯著下調(diào)(P0.05),而且NVP-BEZ235的效果最強；5.通路抑制劑LY294002、NVP-BEZ235和尼克酰胺共處理鵝肝細胞,能減弱尼克酰胺單獨處理對脂肪酸氧化關鍵因子的抑制效果,而且添加NVP-BEZ235的這種減弱效果更強；但是脂肪酸氧化關鍵因子CPTl蛋白表達上卻是添加LY294002時最高(P0.05)；6.脂質(zhì)轉(zhuǎn)運關鍵因子能被尼克酰胺所抑制,當再添加抑制劑LY294002、 NVP-BEZ235和Rapamycin時,脂質(zhì)轉(zhuǎn)運關鍵因子表達被進一步下調(diào)；但是,DGAT1的mRNA表達水平在添加LY294002時被顯著上調(diào)了(P0.05)；同樣FoxO1的mRNA表達水平和蛋白濃度在添加NVP-BEZ235處理時顯著升高(P0.05);7.100μmol/L的尼克酰胺能顯著提高肝細胞活性,增加肝細胞內(nèi)TG等脂質(zhì)的含量,減少VLDL的生成分泌和胞外TG含量；當添加通路抑制劑LY294002、NVP-BEZ235時,細胞活性變化不大,肝細胞內(nèi)TG等脂質(zhì)含量顯著降低(P0.05),VLDL和胞外TG含量高于尼克酰胺單獨處理組；而添加通路抑制劑Rapamycin時, VLDL和胞外TG含量最低：油紅O染色發(fā)現(xiàn),添加通路抑制劑之后,肝細胞內(nèi)脂滴減少變小,脂質(zhì)含量降低(P0.05),肝細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積作用減弱；
【關鍵詞】：Sirt1 尼克酰胺 PI3K-Akt-mTOR 脂質(zhì)代謝
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S835
【目錄】：

• 摘要5-7
• Summary7-10
• 符號說明10-13
• 1 文獻綜述13-17
• 1.1 Sirt1基因概述13-14
• 1.2 Sirt1與脂質(zhì)代謝14-15
• 1.3 Sirt1與PI3K-Akt-mTOR信號途徑的相互作用15-16
• 1.4 本研究的目的和意義16-17
• 2 材料和方法17-30
• 2.1 材料17-20
• 2.1.1 試驗動物材料17
• 2.1.2 試驗主要儀器17-18
• 2.1.3 試驗主要藥品18-19
• 2.1.4 試驗主要試劑盒19
• 2.1.5 試驗主要藥品的配制19-20
• 2.2 方法20-30
• 2.2.1 試驗動物飼養(yǎng)20-21
• 2.2.2 細胞培養(yǎng)21-22
• 2.2.3 總RNA的提取及質(zhì)量檢測22-23
• 2.2.4 反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA23-24
• 2.2.5 定量引物設計及合成24-25
• 2.2.6 熒光定量PCR25-26
• 2.2.7 CCK-8試劑盒檢測細胞活性26-27
• 2.2.8 油紅O染色檢測脂質(zhì)含量27
• 2.2.9 總蛋白的獲取及濃度測定27-28
• 2.2.10 目的蛋白濃度檢測28-29
• 2.2.11 Western Blot檢測蛋白表達29-30
• 2.2.12 試驗數(shù)據(jù)分析30
• 3 結果及分析30-52
• 3.1 Sirt1抑制劑尼克酰胺對鵝肝細胞脂質(zhì)代謝的影響30-40
• 3.1.1 尼克酰胺最佳抑制濃度的篩選30
• 3.1.2 Sirt1抑制劑尼克酰胺對鵝肝細胞細胞內(nèi)外脂質(zhì)含量的影響30-34
• 3.1.3 尼克酰胺對脂肪酸合成、脂肪酸氧化及脂質(zhì)轉(zhuǎn)運途徑關鍵因子的影響34-40
• 3.2 Sirt1對PI3K-Akt-mTOR信號通路活性的影響40-42
• 3.3 Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑對脂質(zhì)代謝的影響42-52
• 3.3.1 Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑對細胞內(nèi)外脂質(zhì)含量的影響42-46
• 3.3.2 Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑對脂肪酸合成、脂肪酸氧化及脂質(zhì)轉(zhuǎn)運途徑關鍵因子的影響46-52
• 4 討論52-60
• 4.1 Sirt1在脂質(zhì)沉積中的調(diào)控作用52-54
• 4.2 Sirt1對PI3K-Akt-mTOR信號通路的調(diào)控作用54-56
• 4.3 Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑對脂質(zhì)代謝的調(diào)控作用56-60
• 4.3.1 Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑調(diào)控脂質(zhì)合成和氧化56-58
• 4.3.2 Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑對脂質(zhì)轉(zhuǎn)運的調(diào)控58-60
• 5 結論60-61
• 參考文獻61-69
• 致謝69-70
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄70

【相似文獻】

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳曉亮;CXC195通過抑制PI3K-AKT-mTOR信號通路和激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激調(diào)控人肝癌細胞增殖及凋亡[D];南昌大學;2016年

2 孟艷;PI3K-Akt-mTOR信號通路參與調(diào)控細胞分化[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 熊祥平;Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑對鵝肝細胞脂質(zhì)沉積的影響研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2016年

2 宋奇;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激通過PI3K-Akt-mTOR通路調(diào)控鵝原代肝細胞脂質(zhì)代謝的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2016年

  本文關鍵詞：Sirt1通過PI3K-Akt-mTOR信號途徑對鵝肝細胞脂質(zhì)沉積的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：283253