研究目的:犬乳腺腫瘤是母犬最常見的腫瘤,其中約50%是惡性的,它是小動(dòng)物臨床重要疾病之一。采用常規(guī)腫瘤治療方法(手術(shù)、化療和放療或他們的組合)后,高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌患犬仍會(huì)死于腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。與人類患者一樣,腫瘤中存在腫瘤干細(xì)胞導(dǎo)致這一臨床現(xiàn)象。鹽霉素(SAL),是從白色鏈霉菌(Streptomycesalbus)培養(yǎng)液中提取的聚醚類抗生素,作為抗球蟲藥廣泛的用于經(jīng)濟(jì)動(dòng)物。目前已證明鹽霉素可以在體外體內(nèi)抑制多種人類腫瘤。本研究著眼于鹽霉素對(duì)犬乳腺癌細(xì)胞系及其癌干細(xì)胞的抗癌作用。研究方法:1、使用無血清懸浮培養(yǎng)技術(shù)從母代細(xì)胞CMT7364和CIPp中獲得微球體CMT7364S和CIPpS。從CD44+CD24-/low表型,多柔吡星和順鉑的半數(shù)致死量IC50,細(xì)胞集落形成能力,侵襲能力,β-catenin、CyclinDl、CD44和Oct-4蛋白表達(dá)量和異體成瘤能力等方面,分析微球體的特性。2、通過體外試驗(yàn),評(píng)估鹽霉素對(duì)于CMT7364和CIPp細(xì)胞活力、凋亡細(xì)胞比例、細(xì)胞周期的影響;通過體內(nèi)試驗(yàn)評(píng)估鹽霉素對(duì)CMT7364異體成瘤、肺部轉(zhuǎn)移及β-catenin和Cyclin D1在腫瘤組織中的表達(dá)的影響,研究鹽霉素對(duì)于犬乳腺癌的抑制作用。3、使用梯度濃度的鹽霉素處理CMT7364S和CIPpS,觀察鹽霉素對(duì)細(xì)胞活力、CD44+CD24-/loW表型、細(xì)胞集落形成能力、侵襲能力、微球體形成能力及β-catenin、CyclinDl及Oct-4蛋白表達(dá)量的影響,評(píng)估鹽霉素對(duì)微球體干細(xì)胞特性的影響。研究結(jié)果:1、微球體CMT7364S和CIPpS具有癌干細(xì)胞特性。CMT7364S和CIPpS以CD44+CD24-/low表型細(xì)胞為主。與CMT7364和CIPp相比,CMT7364S和CIPpS具有更高的多柔吡星和順鉑IC50,更強(qiáng)細(xì)胞集落形成能力、侵襲能力,干細(xì)胞標(biāo)記蛋白CD44、Oct-4及Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白β-catenin和Cyclin D1表達(dá)量更高。與CMT7364相比,CMT7364S的異體成瘤能力更強(qiáng),形成的肺轉(zhuǎn)移灶更多。2、在體外鹽霉素對(duì)CMT7364和CIPp的增殖抑制呈現(xiàn)時(shí)間-劑量依賴性,其作用機(jī)制可能與增加CMT7364和CIPp的凋亡細(xì)胞比例,及G0/G1期細(xì)胞比例有關(guān);在體內(nèi)霉素可以抑制CMT7364在BALB/c小鼠的生長(zhǎng)和肺部轉(zhuǎn)移,降低Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白β-catenin和Cyclin D1的表達(dá)在腫瘤組織中的表達(dá)。3、鹽霉素抑制CMT7364S和CIPpS的癌干細(xì)胞能力。CMT7364S與CMT7364及CIPpS與CIPp的鹽霉素48 h IC50無差異;暴露于不同濃度的鹽霉素可以不同程度的抑制CMT7364S和CIPpS的微球體形、細(xì)胞集落形成及侵襲能力。與此同時(shí),鹽霉素還可以降低CMT7364S和CIPpS中CD44+ CD24-/loW表型細(xì)胞比例,抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白β-catenin和Cyclin D1和干細(xì)胞標(biāo)記CD44和Oct-4的表達(dá)。結(jié)論:犬乳腺癌細(xì)胞中存在犬乳腺癌干細(xì)胞。鹽霉素通過抑制犬乳腺癌細(xì)胞增殖、阻滯細(xì)胞周期、增加細(xì)胞凋亡、干擾Wnt/β-catenin信號(hào)通路、抑制犬乳腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移、抑制犬乳腺癌干細(xì)胞等多種機(jī)制發(fā)揮抗癌作用。鹽霉素有望成為治療犬乳腺癌的化療藥物。
【學(xué)位單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S858.292
【部分圖文】：

鹽霉素作為新發(fā)現(xiàn)的抗腫瘤藥物，其抗腫瘤機(jī)制仍在研究中。目前發(fā)現(xiàn)鹽霉素可以通過激活逡逑非正常細(xì)胞死亡途徑，干擾Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ、Ａｋｔ／ＮＦ－ＫＢ等信號(hào)通路；增加ＤＮＡ損傷；組織細(xì)胞逡逑周期等多種途徑抑制腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞（圖１－４）邋［Ｉ２Ｎ１２３］。逡逑１０逡逑

在本研究屮，我們通過流式細(xì)胞技術(shù)分析ＣＭＴ７３６４／ＣＭＴ７３６４Ｓ和ＣＩＰｐ／ＣＩＰｐＳ中ＣＤ４４＋逡逑S80２４－／｜。？細(xì)胞比例》圖２－２為0＾丁７３６４／0＾�。罚常叮矗岛停ǎ贺�？０／（：丨卩０５的00４４－八？（：）g翰４ａS唷炅魘劍]3?細(xì)胞圖，Ｑ丨為邋ＣＤＡｆ—ＣＤｌｆ邋細(xì)胞，Ｑ２邋為邋ＣＤ４４＋ＣＤ２４＋細(xì)胞，Ｑ３邋為邋ＣＤｄｔＣＤｌＶ１？細(xì)胞，Ｑ４逡逑為邋ＣＤ４４＿／１°Ｗ邋ＣＤＳＶ。＊邋細(xì)胞。逡逑Ｓｐｈｅｒｅｓ邐Ａｄｈｅｒｅｎｔｓ逡逑１０５］ｑｉ邐Ｑ２邐！0１邐Ｑ２邐；逡逑１0４；邋０．０２８邐１．３５邐＾０．１５邐０．９７逡逑Ｉ邋ｉ0３ｉ邐ｉ逡逑ｇ…邐ｉ逡逑Ｏ邋ｙ邋■邐Ｈ逡逑ｗ邐１０邋１０４邐浪｝邋Ｑ３邋］Ｑ４邋［Ｘ邋Ｊ邋Ｑ３逡逑ＣＵ邐0邋；０．４１邐９８２邐ｉ邋１．0３邐９７邋９逡逑ｆ＊邋？邋＇�。ⅰ觯�？邋？邋？？—？ｔ邐－？ｒ＾｜，，，ｒ＂ｔ邋．邋？邋．？—ｔ邋．，？？．．．，逡逑ｒｊ邐１０ｓ邋：Ｑ１邐Ｑ２邐Ｑ１邐Ｑ２逡逑１0４：０＿０３０邐３．５２邐０．０３６邐１．９３逡逑Ｑ．邋１0３］逡逑５邋，0２ｉ＿邋．＇電邐！邋邐．[玨澹咤遑義�；：：傘８焌＾逡逑１０°邋１０１邋１０２邋１０３邋１0４１0５邋１０°邋１０１邋１０２邋１０３邋１０４１０５逡逑ＣＤ４４－ＡＰＣ逡逑圖２－２典型的ＣＤ４４－ＡＰＣ邋ＣＤ２４－ＰＥ流式細(xì)胞圖逡逑Ｆｉｇ．邋２－２邋Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ邋ｆｌｏｗ邋ｐｉｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ＣＤ４４－八ＰＣ邋ＣＤ２４－ＰＥ逡逑在邋ＣＭＴ７３６４／ＣＭＴ７３６４Ｓ邋及邋ＣＩＰｐ／ＣＩＰｐＳ邋中

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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2828223