小麥、大麥、燕麥和玉米等谷類作物在生長(zhǎng)及其儲(chǔ)藏加工過(guò)程中均易感染禾谷鐮刀菌而產(chǎn)生嘔吐毒素(DON)。人畜如果長(zhǎng)期攝入了一定量被DON污染的食物或飼料會(huì)出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹瀉、發(fā)燒等不良反應(yīng),更嚴(yán)重的會(huì)引起體重下降、免疫抑制和細(xì)胞毒性等癥狀。世界大多數(shù)國(guó)家和地區(qū)都制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。因此,建立準(zhǔn)確度高的DON檢測(cè)方法為DON的污染分析提供可靠的數(shù)據(jù)具有重要的意義,研究高效、簡(jiǎn)便和安全的降解DON方法,為保障消費(fèi)者的健康和安全也具有十分重要的意義,本研究圍繞上述問(wèn)題進(jìn)行了系列的研究,取得了以下主要成果:1、在國(guó)標(biāo)GB5009.111-2016的基礎(chǔ)上優(yōu)化了HPLC檢測(cè)條件:流動(dòng)相為乙腈:水(1:9,v/v)溶液,流速1 mL/min,進(jìn)樣量20μL、柱溫30℃、紫外檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm,DON出峰時(shí)間為t_R=10.35 min。玉米加標(biāo)DON最優(yōu)提取條件是:乙腈:水(84:16,v/v)溶液作為提取溶劑,2次超聲提取30 min,每次3.00 mL,此時(shí)樣品中DON的提取率為96.28%。Supel~(TM)Tox DON SPE凈化柱的條件是:上樣溶劑為乙腈:水(84:16,v/v)溶液1.00 mL,再以4.00 mL上樣溶劑洗脫,DON的回收率可達(dá)99.91%,且該DON凈化柱的重復(fù)使用10次性能良好。DON標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.01-10.00μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系很好,回歸方程為y=19274x-236.41,相關(guān)系數(shù)R~2=0.9999。在0.10-1.00μg/mL添加水平之間,DON回收率在94.82-96.49%之間,RSD在2.54-3.36%之間,精密度和回收率均好,可以滿足檢測(cè)需要。2、比較了Supel~(TM)Tox DON SPE凈化柱、DON免疫親和柱和通用型的ENVI-C18固相萃取小柱,結(jié)果表明:通用型的ENVI-C18柱凈化效果差,而DON免疫親和柱和Supel~(TM)Tox DON SPE柱都能明顯地去除較多雜質(zhì),有很好的凈化效果,且回收率也比較接近,均大于93.75%。但Supel~(TM)Tox DON SPE凈化柱不需要淋洗步驟,操作更簡(jiǎn)便,而且具有10倍于免疫柱的載量,因此性價(jià)比更高。然后對(duì)江西地區(qū)15種谷類食品和5種飼料共計(jì)120份樣品進(jìn)行了DON的污染分析,結(jié)果表明:15種谷類樣品有11種樣品檢出率為100.00%,其中3種樣品檢出率為83.33%,僅糯米樣品未檢出,但均未超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),可見DON的污染在糧谷類中十分普遍。5種不同飼料樣品DON檢出率均為100.00%,但飼料級(jí)小麥DON最高檢出值為6.92μg/g(國(guó)標(biāo)5.00μg/g),超標(biāo)率達(dá)16.67%,其余4種飼料未超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。3、本研究比較了四種降解DON的處理方法。結(jié)果表明加熱能夠降解一定量的DON,在100-140℃的溫度范圍內(nèi)DON的降解率隨著溫度的升高呈現(xiàn)上升趨勢(shì),且相同溫度下,油浴加熱方式降解效果好于烘箱加熱,在140℃加熱30 min條件下,油浴的降解率為90.49%,而烘箱加熱降解僅為58.64%。紫外降解DON與紫外波長(zhǎng)、距離和時(shí)間有關(guān),在紫外波長(zhǎng)254 nm、照射距離為5 cm處,6 h后的降解率僅為32.43%,效果不明顯。在pH為8、9、10的堿性條件下,DON的穩(wěn)定性逐漸下降,水浴80℃處理30 min后,DON分別下降4.25%、12.07%、14.39%,碳酸鈉對(duì)DON的降解優(yōu)于碳酸氫鈉和碳酸鉀,0.20%碳酸鈉溶液100℃處理10、30、40 min后,DON的降解率分別為71.58%、98.57%、100%。臭氧流量0.5 L/min,在50 mL的超純水(pH=4.0、0℃)中充5 min可飽和,經(jīng)碘量法測(cè)定水中臭氧含量為73.2 mg/L。采用該條件下的臭氧水對(duì)5.0μg的DON標(biāo)準(zhǔn)品降解率可達(dá)99.00%,降解產(chǎn)物經(jīng)HPLC檢測(cè)到兩個(gè)未知色譜峰x和y。采用油浴(140℃、1 h)、堿處理(0.20%碳酸鈉、100℃、40 min)、飽和臭氧水(pH=4.0、0℃,73.2 mg/L)對(duì)DON加標(biāo)面粉樣品處理后,DON的降解率分別為56.35%、63.36%、82.54%,三種降解率分別都小于相同方法處理標(biāo)準(zhǔn)DON的降解率,說(shuō)明面粉中介質(zhì)的存在會(huì)影響DON的降解。
【學(xué)位單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：TS210.7;S816.17
【部分圖文】：

圖 1-1 DON 化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1-1 Chemical structure of deoxynivalenol (DON)霉病易發(fā)生在溫暖濕潤(rùn)的地區(qū)，該病害不僅造成小麥于該真菌代謝的一種次級(jí)產(chǎn)物 DON，使得該類農(nóng)產(chǎn) 1970 年日本的諸罔信一等[1]發(fā)現(xiàn)嘔吐毒素以來(lái)，隨不斷深入，DON 的毒性逐漸被揭示，人和牲畜如果攝型癥狀是嘔吐和腹瀉，因此該毒素被習(xí)慣稱之為嘔吐致死亡。世界衛(wèi)生組織（WHO）和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織

江西糧谷類和飼料樣品中嘔吐毒素污染分析及其降解研究2.4.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定由于 DON 分子結(jié)構(gòu)式不飽和酮基的存在，使得該真菌毒素具有紫外吸收，但與其它多種物質(zhì)的紫外吸收有重疊，并非特征性。紫外照射下不顯熒光。為了確定 DON的最大吸收波長(zhǎng)，方便后續(xù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的方法建立，本實(shí)驗(yàn)采用乙腈：水（10:90,v/v）溶液作為流動(dòng)相，以 DAD 檢測(cè)器對(duì) DON 標(biāo)準(zhǔn)品在波長(zhǎng) 200-400 nm 范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果如圖 2-1 所示。220.2 nm2.4 結(jié)果與分析

江西糧谷類和飼料樣品中嘔吐毒素污染分析及其降解研究2.4.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定由于 DON 分子結(jié)構(gòu)式不飽和酮基的存在，使得該真菌毒素具有紫外吸收，但與其它多種物質(zhì)的紫外吸收有重疊，并非特征性。紫外照射下不顯熒光。為了確定 DON的最大吸收波長(zhǎng)，方便后續(xù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的方法建立，本實(shí)驗(yàn)采用乙腈：水（10:90,v/v）溶液作為流動(dòng)相，以 DAD 檢測(cè)器對(duì) DON 標(biāo)準(zhǔn)品在波長(zhǎng) 200-400 nm 范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果如圖 2-1 所示。220.2 nm2.4 結(jié)果與分析

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2824181