雞安卡拉病是由禽腺病毒Ⅰ群血清4型引起的一種以心包積水肝炎綜合征為主要特征的急性傳染病。1987年,該病在巴基斯坦安加拉哥特地區(qū)發(fā)現第一起病例,因此以地名命名該病。據當時的報道,1988年夏季在費薩拉巴德發(fā)生該病,隨后擴散到全巴基斯坦,造成了過億只雞死亡[1]。自此,該病在北美洲國家、歐洲國家、亞洲國家等多個國家相繼被報道。1997年安卡拉病傳入中國,由于當時在我國并沒有造成大范圍流行,因此未引起我國養(yǎng)禽業(yè)的重視[2]。但是,從2015年往后,安卡拉病在國內多個省市,如遼寧、河南、河北、湖北、江蘇、吉林等地爆發(fā),給養(yǎng)禽業(yè)造成了不小的經濟損失。本實驗對吉林地區(qū)九臺、合心、龍嘉等多個養(yǎng)雞場肉雞疑似發(fā)病雞群,采集病死雞的肝臟,分離出一株野毒株,命名為FAd V4-JL16865株,提取DNA,并進行特異性引物的設計,進行PCR擴增,然后測序和序列分析。選擇被感染的雞的肝臟進行研磨,制成懸液,反復凍融三次,進行離心,取上清液,經尿囊腔接種9日齡的SPF雞胚,盲傳三代,觀察雞胚的生長發(fā)育和死亡情況。然后將第三代尿囊液接種到5日齡的SPF雞胚,以觀察雞胚感染后的臨床癥狀,是否死亡等情況,7天后,全部撲殺,采集心臟、肝臟等組織器官制作組織切片,經HE染色觀察組織病理學損傷。然后對分離鑒定后的毒株做生物學特性分析。實驗證明:從吉林地區(qū)采樣的疑似發(fā)生雞安卡拉病的不同雞場分離到的17份病料中,分離到10株安卡拉病毒,接種雞胚后能導致雞胚精神沉郁、發(fā)育減緩,從第三天開始出現死亡的現象。組織學觀察表明,本實驗分離到的毒株能引起心肌細胞、肝細胞等多種組織發(fā)生顆粒變形、空泡變性以及壞死等損傷。從中選取一株表達比較好的毒株進行了全基因序列測序并分析,根據系統(tǒng)發(fā)育樹顯示,分離到毒株與I群禽腺病毒C亞群同源性最高,并與血清4型在同一分支上,證明了該毒株就是雞安卡拉病毒。隨后,針對吉林地區(qū)規(guī)模化養(yǎng)殖場進行采樣,開展發(fā)病情況調查,統(tǒng)計發(fā)現在510份樣本中,FAV4檢出率為11.57%。結論:本實驗成功分離鑒定一株雞安卡拉病毒,命名為FAd V4-JL16865株,該毒株能使雞胚發(fā)生肝炎等病理損傷,并給心臟、肝臟帶來組織改變,對毒株進行熱敏感性、酸堿度敏感性和有機溶劑等理化特性的檢測,了解毒株的生物學特性;發(fā)病情況調查結果顯示,在510份樣本中,FAV4陽性檢出率為11.57%。
【學位單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S852.65
【部分圖文】：

圖 1.3 第一組安卡拉引物 PCR 擴增結果DL2000 Marker；1-7：樣品；8：陰性對照) The amplification result of one team by Primer000 Marker；1-7：Sample set；8：blank contrast)

圖 1.3 第一組安卡拉引物 PCR 擴增結果：DL2000 Marker；1-7：樣品；8：陰性對照) 1.3 The amplification result of one team by PrimerL2000 Marker；1-7：Sample set；8：blank contrast)

圖 1.5 第三組安卡拉引物 PCR 擴增結果(M：DL2000 Marker；1：陰性對照；2-6：樣品)Fig.1.5 The amplification result of three team by(M:DL2000 Marker；1：blank contrast；2-6：Sam果 Sanger 平臺進行全基因組測序是目前實驗階段應用最為直接明了的測序法，核心原（ddNTP）的不含羥基，DNA 鏈每次加入 ddNTP，反確性比較高。對上述三組 PCR 產物進行回收測序，2據 FAdV-4 型（GU188428.1）設計的引物未成功擴增FAdV-4（No.DQ314840.2）進行測序。應用 Sanger 平了全長 43723bp 的全基因序列。然后根據全序列進行

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李素芝;鄭必海;閆春城;孫澤平;李s

本文編號：2811257