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雞卷羽性狀候選基因KRT75和KRT75L4的表達(dá)特征分析

發(fā)布時(shí)間:2020-09-02 21:07
   羽毛作為一種直觀、易于觀察且表現(xiàn)豐富的外觀性狀,一直是人們研究的熱點(diǎn)。國外學(xué)者研究顯示KRT75基因cds區(qū)69 bp的缺失是導(dǎo)致雞卷羽性狀發(fā)生的主要原因,但在本課題組早期研究發(fā)現(xiàn)我國地方品種麒麟雞的KRT75基因與正常羽的的完全相同,不存在缺失。同時(shí)我們通過一代測(cè)序檢測(cè)發(fā)現(xiàn)KRT75L4基因cds區(qū)存在15 bp(chr:33:1295046-1295060)缺失。這表明我國地方雞種與國外雞種卷羽形成的機(jī)制不同。為了進(jìn)一步證實(shí)我國地方雞種麒麟雞卷羽形成的原因,本研究以麒麟雞和懷鄉(xiāng)雞為研究對(duì)象,針對(duì)卷羽性狀的候選基因KRT75L4和KRT75基因展開了較為深入的研究,旨在探索調(diào)控麒麟雞卷羽性狀發(fā)生的主要基因。本研究采集不同品種且無血緣關(guān)系的麒麟雞104只,片羽雞95只和雜交F1代半卷羽86只,對(duì)麒麟雞的KRT75L4基因進(jìn)行檢驗(yàn),并采用生物信息學(xué)的方式法預(yù)測(cè)其功能;對(duì)胚胎期和出生后麒麟雞、懷鄉(xiāng)雞的KRT75L4和KRT75基因的時(shí)序表達(dá)規(guī)律和在皮膚和肝臟中的時(shí)空表達(dá)情況進(jìn)行了研究;通過Western Blot對(duì)麒麟雞和懷鄉(xiāng)雞的KRT75蛋白的時(shí)序表達(dá)規(guī)律并采用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)KRT75蛋白表達(dá)的具體位置。結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)所有麒麟雞的KRT75L4基因均存在缺失,而在F1代則出現(xiàn)缺失和未缺失的雜帶,說明KRT75L4基因的缺失是卷羽麒麟雞所特有的,并且可以遺傳給下一代;通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)KRT75L4蛋白是一個(gè)親水,無信號(hào)肽,無跨膜區(qū)的蛋白,雖然其堿基的改變導(dǎo)致其二級(jí)結(jié)構(gòu)有少許變化,但是其三級(jí)結(jié)構(gòu)并未發(fā)生改變。(2)胚胎期麒麟雞和懷鄉(xiāng)雞的KRT75L4基因在皮膚組織都是呈先升后降的表達(dá)趨勢(shì),所不同的是麒麟雞在14胚齡達(dá)到最高值,而懷鄉(xiāng)雞則在11胚齡達(dá)到最高值;胚胎期KRT75基因在懷鄉(xiāng)雞中是上升趨勢(shì),在17胚齡達(dá)到最高峰,而麒麟雞則是先升后將的趨勢(shì),在11胚齡達(dá)到最高峰;出生后的麒麟雞和懷鄉(xiāng)雞的KRT75L4和KRT75都是上升的趨勢(shì)。(3)KRT75蛋白在胚胎期麒麟雞的表達(dá)是呈上升趨勢(shì),而懷鄉(xiāng)雞的卻恰恰相反,是一種下降的趨勢(shì),KRT75蛋白在上皮細(xì)胞中特異性表達(dá),而且多表達(dá)在毛囊的羽小板、軸板和緣板的區(qū)域,極少表達(dá)在髓質(zhì)區(qū)域。綜上所述,卷羽麒麟雞與片羽懷鄉(xiāng)雞的KRT75L4基因在DNA序列上有區(qū)別,卷羽麒麟雞KRT75L4基因cds區(qū)存在15 bp(chr:33:1295046-1295060)缺失,而懷鄉(xiāng)雞沒有缺失。該基因在片羽雞中表達(dá)量達(dá)到峰值的時(shí)間早于卷羽雞。KRT75基因序列在兩個(gè)雞種中無區(qū)別,但是表達(dá)量有區(qū)別。因此,KRT75L4基因突變引起卷羽性狀形成的分子機(jī)制有待深入研究。
【學(xué)位單位】:廣東海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類】:S831.2
【部分圖文】:

雞公,母雞


新石器時(shí)期對(duì)于畜禽的馴養(yǎng)就已經(jīng)開始了,最初它們主要用作玩賞、供。幾千年來,由于地理環(huán)境的差異和復(fù)雜多樣性的生態(tài)條件,不同區(qū)域以及不一樣不同的生活習(xí)慣,在長(zhǎng)達(dá)數(shù)千年的的自然選擇和人工選擇過了家禽資源多樣性,并培育出許多各具特色且品質(zhì)優(yōu)良的地方品種[1-2進(jìn)化過程中由于家禽的基因突變、染色體變異等原因?qū)е铝烁鞣N表型變,如玫瑰冠、雙重冠、豆冠、絲羽、卷羽、冠毛、耳毛、胡須、裸頸、]。文所研究的麒麟雞是我國廣東粵西一帶的地方特有的家禽品種,因其全向身體外翻卷而得名,又稱為翻毛雞、卷羽雞(見圖 1-1)。在高溫高下,麒麟雞生長(zhǎng)迅速,體型偏大,抗病力強(qiáng),耐熱性能好,耐粗飼,肉當(dāng)?shù)厝苏J(rèn)為麒麟雞具有可治療胃病、風(fēng)濕雜癥等病的功效,因此麒麟雞人們喜愛[4-5]。其獨(dú)特的羽毛外翻的性狀與片羽(正常羽)形成顯著差性狀研究的理想素材,同時(shí)為地方品種遺傳資源的保護(hù)與開發(fā)提供條

角蛋白,系統(tǒng)發(fā)生樹,人類


它們都是在上皮細(xì)胞中獨(dú)特表達(dá)。角蛋白由 54 個(gè)保守基因(28 個(gè) I 型,26 個(gè) II 型)編碼(圖1-2),并以成對(duì)的形式對(duì)組織類型、分化等進(jìn)行調(diào)控。角蛋白作用于多種穩(wěn)態(tài)和應(yīng)力觸發(fā)的機(jī)械和非機(jī)械功能,包括維護(hù)細(xì)胞的完整性,調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移,以及防止細(xì)胞凋亡等。這些生理過程都受到翻譯后角蛋白和其相關(guān)蛋白的嚴(yán)格調(diào)控。角蛋白編碼序列的的突變是細(xì)胞穿透性改變和罕見疾病發(fā)生的基礎(chǔ),其病理生理學(xué)反映了角蛋白的突變會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脆性或組織穩(wěn)態(tài)改變。此外,角蛋白突變或失調(diào)是急、慢性疾病的重要因素因素。角蛋白(Mr:40-70 kDa)是所有上皮細(xì)胞中纖維細(xì)蛋白的主要亞型,已知 54 個(gè)保守的功能基因和蛋白,約占哺乳動(dòng)物角蛋白超家族的四分之三[6]。隨著人類和小鼠基因組的測(cè)序的完成,在 2006 年重新設(shè)計(jì)了一種新的命名法,為了適應(yīng)更多新角蛋白基因的被發(fā)現(xiàn)鑒定[7,8]。針對(duì) I 型和 II 型角蛋白從基因序列、分子結(jié)構(gòu)以及蛋白質(zhì)序列α-螺旋同源性等方面進(jìn)行區(qū)分。由于 I 型角蛋白的總電荷顯示為酸性(pI 4.5-6.0)且分子量往往較小(40-56.5 kDa),而 II 型角蛋白的總電荷一般為中性或者為堿性(pI 6.5-8.5)且分子量較大(50-70 kDa)[9],我們可以通過二維凝膠電泳很容易將它們區(qū)分出來。I 型和 II 型角蛋白在裝配成 10 納米長(zhǎng)絲時(shí)是嚴(yán)格相互依賴的

示意圖,示意圖,絨羽,性狀


雞卷羽性狀候選基因 KRT75 和 KRT75L4 的表達(dá)特征分析是髓質(zhì)和羽枝嵴的形成等方面,因此推測(cè) KRT75 基因在表皮的羽和羽小枝分化的過程發(fā)揮作用[24]。由于國外針對(duì)卷羽的研究采用為茅斯洛克卷羽雞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,這種雞出雛時(shí)絨羽正常,沒有表現(xiàn)而麒麟雞的的仔雞初生時(shí)絨羽彎曲明顯(圖 1-4)。這種表現(xiàn)的差由國、內(nèi)外品種差異還是其他遺傳變異所致,但是我們可以確定麒狀的不是 KRT75 基因突變導(dǎo)致的,因此引起麒麟雞卷羽性狀發(fā)生鑒定及其分子機(jī)制還需要我們更深入的研究。

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3 黃若濤;湯祖杭;羅東君;莫巨勁;王秀彩;;懷鄉(xiāng)雞的調(diào)查報(bào)告(摘要)[J];養(yǎng)禽與禽病防治;1988年05期

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7 梁翠萍;陳靜文;王潤(rùn)蓮;汪忠艷;劉添儀;;飼糧非植酸磷水平對(duì)0-4周齡懷鄉(xiāng)雞趾骨特性及內(nèi)臟器官發(fā)育的影響[J];廣東飼料;2019年07期

8 楊蕓瑜;生冉;陳亮伍;劉洪偉;覃天來;石達(dá)鋒;張學(xué)強(qiáng);;日糧添加維生素E和有機(jī)硒對(duì)42日齡懷鄉(xiāng)雞血清抗氧化指標(biāo)的影響[J];廣東飼料;2018年12期

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6 陶林;杜炳旺;陳建;劉宜林;陳運(yùn)冬;葉偉慶;李東華;;信宜懷鄉(xiāng)雞不同品系產(chǎn)蛋性能比較分析[A];第四屆(2014)中國黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會(huì)會(huì)刊[C];2014年

7 趙志遠(yuǎn);杜炳旺;陳婷;張俊勇;許英梅;;優(yōu)質(zhì)肉雞三個(gè)不同配套組合F1代生產(chǎn)性能的測(cè)定[A];全球肉雞產(chǎn)業(yè)論壇暨第二屆中國白羽肉雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展大會(huì)會(huì)刊[C];2010年

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1 記者 馮海波 通訊員 信科宣;信宜打造地方特色農(nóng)業(yè)品牌[N];廣東科技報(bào);2011年

2 記者 劉俊 通訊員 粵農(nóng)信 連少琴;扶貧農(nóng)產(chǎn)品 找到好東家[N];南方日?qǐng)?bào);2012年

3 林福益;“養(yǎng)雞王國”一年產(chǎn)值16億[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2004年

4 本報(bào)記者 馮海波 劉宇雄 通訊員 李志 李國亮;村會(huì)“聯(lián)姻”科技服務(wù)“常在鄉(xiāng)”[N];廣東科技報(bào);2009年

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1 王知彬;雞卷羽性狀候選基因KRT75和KRT75L4的表達(dá)特征分析[D];廣東海洋大學(xué);2019年

2 李東華;麒麟雞(卷羽雞)胚胎毛囊組織轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析[D];廣東海洋大學(xué);2015年

3 趙志遠(yuǎn);貴妃雞與懷鄉(xiāng)雞雜交效果觀察及Ex-FABP基因分子遺傳特征研究[D];廣東海洋大學(xué);2010年



本文編號(hào):2811102

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