豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PE DV)引起的一種急性、高度接觸性腸道傳染病。該病毒是導致初生仔豬腹瀉和死亡的主要致病原之一。成熟的初始B細胞能識別抗原,活化、增殖并分化成漿細胞,合成和分泌抗體而發(fā)揮清除病原體的作用。目前對于PEDV誘導B細胞免疫應答的機制尚不清楚,本研究通過體外實驗,探究了來自不同年齡豬的B細胞分別對PEDV強毒株和弱毒株刺激后的免疫應答效應,旨在為深入闡明PEDV的感染免疫機制奠定基礎。為了明確PEDV對B細胞的激活作用。分別采集初生仔豬、保育豬、成年母豬的前腔靜脈血,采用密度梯度離心技術結合免疫磁珠分選細胞法,從外周血中分選CD21~+B細胞。用PEDV強毒株QY2016和弱毒株CV777分別感染不同年齡豬的B細胞,感染后24 h應用流式細胞術分析B細胞表面分子MHC II、CD80、CD54、CD27及mIgM的表達水平。強毒株QY2016和CV777株均不能刺激各年齡豬B細胞中表達表面分子MHC II、CD80和mIgM的細胞增加,但能引起初生仔豬B細胞表達協(xié)同刺激分子CD54與CD27的含量顯著上升。野毒株QY2016感染組中M HC II~+、CD80~+、mIgM~+及mIgM~+CD27~+B細胞含量低于弱毒株CV777感染組。感染后0 h、24 h和48 h,應用ELISA檢測細胞上清中IL-1、IL-22、IL-4、I L-6、IL-10、IFN-α、GM-CSF、M-CSF、IFN-α和TGF-β的表達水平。QY2016株和CV777引起均能引起初生仔豬B細胞分泌IFN-α和GM-CSF,保育豬B細胞分泌IL-1、IFN-α、IL-4,成年母豬分泌TGF-β,均不能引起各年齡豬的B細胞分泌I L-6和IL-10。其他細胞因子的分泌在不同毒株和不同年齡之間不同,但相對于仔豬和母豬,保育豬的B細胞分泌細胞因子的種類較多。感染后0 d、4 d和7 d,通過ELISA測定細胞上清中的IgM、IgA和IgG的含量,強毒株QY2016僅能夠誘導保育豬B細胞分泌IgM和IgG。弱毒株CV777能誘導保育豬的B細胞可分泌IgM、IgA,母豬B細胞分泌IgA和IgG。強毒株和弱毒株均不能誘導初生仔豬B細胞分泌IgM、IgA和IgG。上述結果表明,PEDV誘導的B細胞表面分子表達、細胞因子與抗體應答與豬的年齡和毒株毒力的強弱密切相關。與弱毒株相比,強毒株刺激B細胞后的應答效應較弱,初生仔豬和母豬B細胞對PEDV的應答反應較保育豬低。
【學位單位】：河北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S852.4
【部分圖文】：

河北農(nóng)業(yè)大學碩士學位（畢業(yè)）論文3 結果3.1 病毒蝕斑及 TCID50PEDV 感染 Vero-81 細胞后約 96 h 出現(xiàn)蝕斑。如圖 1 所示，病毒蝕斑在顯微鏡下觀察，細胞培養(yǎng)液本身含有酚紅呈現(xiàn)顏色，而病毒蝕斑形成的局限性病變細胞區(qū)邊緣呈現(xiàn)細胞核聚集現(xiàn)象、中央細胞大部分脫落。挑取蝕斑，將其接種 Vero-81 細胞，并進行傳代，取 PEDV QY Clone F6 代細胞毒做 10-1~10-7稀釋接種到 Vero-81 細胞，同時設置不接毒的陰性對照。感染后 120 h，按照 Reed-Muench 法計算該病毒液的 TCID50，TCID50=104.65/0.1 mL=105.65/mL。

豬流行性腹瀉病毒誘導的 B 細胞免疫應答研究表 1 初生仔豬 B 細胞感染 PEDV 后 CD54+、CD80+、MHC-Ⅱ+細胞的百分1 The percentage of CD54+, CD80+and MHC-Ⅱ+cells in neonatal pigs B cells infectelesQY 2016 感染組QY 2016 groupCV777 感染組CV777 groupN3.966±0.757a2.833±1.193ab13.650±2.050 22.500±2.121B225.850±7.566 41.050±5.161C4小寫字母分別表示差異極顯著和差異顯著（P<0.01 或<0.001 和差異顯著 P<0.05）.ts (majuscule and minuscule) indicates significant differences (P<0.01or 0.001 and P<0.05) between gr

河北農(nóng)業(yè)大學碩士學位（畢業(yè)）論文表 2 初生仔豬感染 PEDV 后 IgM+、CD27+、IgM+CD27+細胞Table 2 IgM+, IgM+CD27+cells in neonnate pig infected with PEDV組別GroupsQY 2016 感染組QY 2016 groupCV777 感染組CV777 group陰性對照Negative controlIgM+16.600±0.141 32.500±1.555A30.000±0.870aCD27+66.300±12.020 52.000±2.121 47.000±3.959IgM+CD27+3.750±0.919 8.750±0.070B2.900±0.282注：與 QY 2016 感染組相比，上標大寫、小寫字母分別表示差異極顯著（P<0.05 和差異顯著 P<0.01）Note: Compared with the PEDV QY infection group, Superccripts(majuscule or minuscule) indicates significates differences(P<0.01or P<0.05)between gruopsQY 2016CV777

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本文編號：2807544