本文關(guān)鍵詞：牛蛙皮膚抗菌肽Catesbeianin-1在PichiaPink中表達(dá)條件的優(yōu)化及其粗提物對(duì)產(chǎn)蛋后期雞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：兩棲類脊椎動(dòng)物由于是從水生過渡到陸生,因而具有水生與陸生的雙重特性。它們的皮膚具有免疫防御的作用,在抵御環(huán)境病原微生物的侵襲方面具有重要作用,皮膚表面含有大量的粘液,在粘液中含有大量的抗菌活性物質(zhì),而抗菌肽正是其中最主要的物質(zhì)之一,它們分子結(jié)構(gòu)特殊、功能復(fù)雜多樣。抗菌肽在自然界中廣泛存在,具有較好的生物學(xué)活性,分子量小,大多是2000~7000bp左右,由20~60個(gè)氨基酸組成。由于抗生素的濫用,造成了大量的耐藥菌株出現(xiàn),不僅為生產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,也造成了對(duì)環(huán)境的嚴(yán)重污染。越來越多的研究表明,抗菌肽具有廣譜抗菌,不易使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性,不會(huì)造成藥物的殘留等優(yōu)點(diǎn),受到人們的廣泛關(guān)注。畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)近年來發(fā)展較為迅速,多用于進(jìn)行外源蛋白的表達(dá)。該系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn):具有醇氧化酶1(AOX1)基因的啟動(dòng)子,以甲醇為唯一碳源進(jìn)行發(fā)酵表達(dá),在有氧條件下進(jìn)行高密度發(fā)酵,表達(dá)的外源蛋白具有生物學(xué)活性等。而Pichia Pink表達(dá)系統(tǒng)是在巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的又一種真核重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)。該系統(tǒng)除了上述優(yōu)點(diǎn)外,其內(nèi)的菌株屬于蛋白酶缺陷型,減少了外源蛋白的降解,另外,其內(nèi)含有高拷貝數(shù)表達(dá)載體,能進(jìn)行外源蛋白的高效表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)室利用Pichia Pink表達(dá)系統(tǒng)成功構(gòu)建酵母重組牛蛙抗菌肽Catesbeianin-1。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上,以擋板瓶對(duì)重組酵母進(jìn)行發(fā)酵表達(dá),探索最適發(fā)酵條件。研究表明,該重組酵母的發(fā)酵溫度為28℃,發(fā)酵初始濃度OD600約為0.2,種子菌培養(yǎng)12h,甲醇添加量為2.5%,能有效縮短發(fā)酵時(shí)間,蛋白分泌表達(dá)量最高,使用發(fā)酵成本最低,其中重組酵母表達(dá)的粗蛋白含量約為5.0 mg/ml。對(duì)分泌表達(dá)的抗菌肽Catesbeianin-1進(jìn)行革蘭氏陰性菌抑菌活性檢測,發(fā)現(xiàn)對(duì)大腸桿菌O157和O78、腸炎沙門菌CMCC50041等10種菌具有較好的抑菌活性。為了研究抗菌肽Catesbeianin-1粗提物對(duì)產(chǎn)蛋后期雞的影響,對(duì)380日齡產(chǎn)蛋雞進(jìn)行飼喂實(shí)驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)飼喂了抗菌肽Catesbeianin-1粗提物的蛋雞產(chǎn)蛋率提高了約3.0%,同時(shí)增加了蛋殼的厚度,在一定程度上提高了蛋品質(zhì),同時(shí)蛋雞的免疫能力也得到了一定程度的提高。本研究為基因工程抗菌肽作為飼料添加劑的臨床應(yīng)用提供了參考依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：畢赤酵母 抗菌肽 優(yōu)化表達(dá) 產(chǎn)蛋后期雞
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S831.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮寫詞表8-10
• 引言10-11
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述11-22
• 第1章 抗菌肽的研究進(jìn)展11-22
• 1.1 抗菌肽的來源11-13
• 1.2 抗菌肽的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)13-14
• 1.3 抗菌肽的生物學(xué)功能14-17
• 1.4 抗菌肽的作用機(jī)制17-19
• 1.5 抗菌肽在動(dòng)物生產(chǎn)上的應(yīng)用19-21
• 1.6 畢赤酵母表達(dá)外源蛋白的制約因素21-22
• 第二篇 研究內(nèi)容22-48
• 第1章 酵母重組抗菌肽Catesbeianin-1 搖瓶發(fā)酵條件的優(yōu)化22-34
• 1.1 材料與方法22-26
• 1.2 結(jié)果26-31
• 1.3 討論31-33
• 1.4 小結(jié)33-34
• 第2章 抗菌肽Catesbeiania-1 粗提物對(duì)產(chǎn)蛋后期雞的作用34-48
• 2.1 材料與方法34-38
• 2.2 結(jié)果38-44
• 2.3 討論44-46
• 2.4 小結(jié)46-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-57
• 導(dǎo)師簡介57-58
• 作者簡介58-59
• 致謝59

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：牛蛙皮膚抗菌肽Catesbeianin-1在PichiaPink中表達(dá)條件的優(yōu)化及其粗提物對(duì)產(chǎn)蛋后期雞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：280507