本文關(guān)鍵詞：DEV感染對(duì)鴨主要TLRs轉(zhuǎn)錄水平影響研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鴨腸炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)又稱鴨瘟病毒(Duck plague virus,DPV),是危害養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展的重要病原之一。目前對(duì)DEV的研究主要集中在基因結(jié)構(gòu)與功能、快速檢測(cè)技術(shù)及誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)等方面,但在DEV感染與鴨天然免疫應(yīng)答方面研究較少。Toll樣受體(Toll like receptors,TLRs)作為一種天然免疫分子,可通過(guò)機(jī)體自身的表面模式識(shí)別受體識(shí)別病原微生物的損傷相關(guān)分子模式并激活胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo),誘導(dǎo)炎性因子以及細(xì)胞因子的產(chǎn)生,最終達(dá)到清除入侵病原體的目的。因此,本文開(kāi)展了DEV感染對(duì)鴨TLRs基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞因子分泌的影響研究,以期為鴨病毒性腸炎(鴨瘟)的預(yù)防與控制提供新思路。主要研究?jī)?nèi)容包括:1.健康鴨組織中TLR2、TLR3和TLR7基因的相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平根據(jù)Gen Bank上鴨TLR2、TLR3、TLR7和β-actin基因設(shè)計(jì)特異性引物,以β-actin為內(nèi)參,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)鴨機(jī)體組織TLR2、TLR3和TLR7基因轉(zhuǎn)錄量進(jìn)行檢測(cè)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):TLR2、TLR3和TLR7基因m RNA在所檢測(cè)組織中均有不同程度轉(zhuǎn)錄,其中TLR2基因在脾臟中轉(zhuǎn)錄最高,依次是肝臟、胰臟、腎臟、氣管、肺臟、十二指腸、肌肉、心臟和腦;TLR3基因在肝臟中轉(zhuǎn)錄最高,依次是腎臟、脾臟、氣管、心臟、肺臟、胰臟、肌肉、十二指腸和腦;TLR7基因在脾臟中轉(zhuǎn)錄最高,依次是肝臟、胰臟、肺臟、氣管、十二指腸、腎臟、肌肉和腦。2.DEV感染對(duì)鴨組織中TLR2、TLR3和TLR7基因轉(zhuǎn)錄的影響采集DEV感染后不同時(shí)間段鴨組織樣本,提取組織樣本總RNA,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)鴨機(jī)體組織TLR2、TLR3和TLR7基因轉(zhuǎn)錄量進(jìn)行檢測(cè)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):與正常組相比較,TLR2、TLR3和TLR7基因在鴨體不同組織中轉(zhuǎn)錄均發(fā)生不同程度變化,其總體趨勢(shì)是,隨著DEV感染時(shí)間的推進(jìn),三種Toll樣基因轉(zhuǎn)錄呈現(xiàn)倒“S”變化,即先升高后降低再升高的現(xiàn)象,但Toll樣受體基因在同一感染時(shí)間上不同鴨體組織的轉(zhuǎn)錄變化未呈現(xiàn)出一定的規(guī)律性。3.DEV感染對(duì)鴨血清和外周淋巴細(xì)胞中細(xì)胞因子分泌的影響采集DEV感染后不同時(shí)間段鴨血清樣本,采用ELISA測(cè)定IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn):DEV感染后鴨血清中IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ分泌均發(fā)生不同程度的變化,其中IL-2在6h時(shí)最高,120h時(shí)最低;IL-6在72h前趨于穩(wěn)定,96h時(shí)降到最低;IL-8在6h時(shí)最高,96h時(shí)最低;IFN-β開(kāi)始時(shí)降低,6~48h時(shí)升高,后又降低,至96h時(shí)開(kāi)始上升;IFN-γ在6h時(shí)最高,18~120h時(shí)呈整體下降趨勢(shì),至168h時(shí)升高。分離健康鴨血液中外周淋巴細(xì)胞,培養(yǎng)呈單層細(xì)胞后,感染DEV,收集感染后不同時(shí)間細(xì)胞樣本,采用ELISA方法測(cè)定IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn):DEV感染后鴨外周淋巴細(xì)胞中IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ分泌均發(fā)生不同程度的變化,其中IL-2和IL-6呈現(xiàn)持續(xù)上升,至4h后分泌趨于穩(wěn)定;IL-8在1h時(shí)開(kāi)始下降,4h時(shí)上升至最高,8h時(shí)下降,12h上升;IFN-β在1h時(shí)開(kāi)始上升,4~8h時(shí)持續(xù)下降,12h時(shí)上升;IFN-γ在1h時(shí)無(wú)變化,4h時(shí)上升,8h時(shí)下降,12h時(shí)上升。結(jié)論:TLR2、TLR3和TLR7基因在正常鴨組織中具有不同程度的轉(zhuǎn)錄,感染DEV后其轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生一定的變化,總體趨勢(shì)沒(méi)有規(guī)律性;鴨血清和鴨外周淋巴細(xì)胞中IL-2、IL-6、IL-8和IFN-γ分泌變化趨勢(shì)大致相同,而IFN-β不同。
【關(guān)鍵詞】：鴨腸炎病毒 TLRs 細(xì)胞因子 熒光定量PCR ELISA
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.32
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞9-10
• 文獻(xiàn)綜述10-22
• Toll 樣受體的研究進(jìn)展10-17
• 細(xì)胞因子研究進(jìn)展17-22
• 第一章 正常鴨源TLRs基因的組織轉(zhuǎn)錄水平研究22-38
• 1 材料23
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物23
• 1.2 主要試劑23
• 1.3 主要儀器23
• 2 方法23-27
• 2.1 引物設(shè)計(jì)與合成23-24
• 2.2 RNA提取及cDNA合成24-26
• 2.3 熒光定量PCR反應(yīng)體系及程序26-27
• 2.4 數(shù)據(jù)處理27
• 3 結(jié)果27-34
• 3.1 RQ-PCR產(chǎn)物的特異性以及擴(kuò)增效率分析27-31
• 3.2 TLRs基因的組織表達(dá)譜31-34
• 4 討論34-38
• 4.1 關(guān)于熒光定量檢測(cè)方法的建立34
• 4.2 關(guān)于TLR2、TLR3和TLR7基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平研究34-38
• 第二章 DEV感染對(duì)鴨主要TLR基因轉(zhuǎn)錄水平影響研究38-72
• 1 材料39
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物39
• 1.2 主要試劑39
• 1.3 主要儀器39
• 2 方法39-40
• 2.1 人工感染及樣品采集39
• 2.2 引物設(shè)計(jì)與合成39
• 2.3 總RNA提取及cDNA合成39
• 2.4 熒光定量PCR反應(yīng)體系及程序39
• 2.5 數(shù)據(jù)處理39-40
• 3 結(jié)果40-70
• 3.1 DEV感染后鴨TLR2基因的組織轉(zhuǎn)錄水平40-50
• 3.2 DEV感染后TLR3基因的組織轉(zhuǎn)錄差異50-60
• 3.3 DEV感染后TLR7基因的組織轉(zhuǎn)錄差異60-70
• 4 討論70-72
• 4.1 關(guān)于免疫與TLRs70
• 4.2 關(guān)于DEV感染與TLRs70-72
• 第三章 DEV感染對(duì)鴨主要細(xì)胞因子表達(dá)影響研究72-83
• 1 材料73
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物73
• 1.2 主要試劑73
• 1.3 主要儀器73
• 2 方法73-75
• 2.1 DEV感染鴨及樣品采集73-74
• 2.2 外周淋巴細(xì)胞的制備及處理74
• 2.3 細(xì)胞因子水平檢測(cè)74-75
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析75
• 3 結(jié)果75-81
• 3.1 DEV感染后鴨血清中五種細(xì)胞因子分泌水平75-78
• 3.2 DEV感染后鴨外周淋巴細(xì)胞中細(xì)胞因子的分泌情況78-81
• 4 討論81-83
• 4.1 DEV感染對(duì)鴨血清中細(xì)胞因子的影響81-82
• 4.2 DEV感染外周淋巴細(xì)胞中細(xì)胞因子的影響82-83
• 全文結(jié)論83-84
• 參考文獻(xiàn)84-91
• 附錄 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況91-92
• 致謝92-93

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本文編號(hào)：280185