發(fā)布時間：2020-08-20 19:02

【摘要】：目前體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)克隆豬在農(nóng)業(yè)和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域都有著廣泛的應(yīng)用前景。但由于體細(xì)胞核移植效率一直很低,限制了克隆豬的應(yīng)用。影響克隆效率的原因有很多,例如表觀遺傳程序的不完全表達(dá)、不適的培養(yǎng)環(huán)境及染色體的異�；�。本文首次研究了羅米魯曲對豬體細(xì)胞核移植胚胎后期發(fā)育能力的影響,并首次將豬體細(xì)胞核移植早期囊胚在人誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng),并分析其結(jié)果。研究結(jié)果如下：1.本章利用不同濃度的羅米魯曲處理豬體細(xì)胞克隆胚胎24小時,尋找最適合濃度,隨后用最適濃度處理不同時間,確定最佳時間和最佳濃度。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)在不同的處理濃度下(0 nM,50 nM,100 nM,200 nM),其中100 nM的囊胚率顯著優(yōu)于對照組和其他處理組(9.8%,12.3%,18.3%,5.2%,P0.05)。用最優(yōu)濃度l00nM的羅米魯曲進行不同時間的處理時(Oh,12h,24h,48h),結(jié)果顯示,24小時的囊胚率優(yōu)于對照組及其他處理組(8.0%,4.7%,13.7%,11.1%)。最后將100nM羅米魯曲處理24小時的豬體細(xì)胞核移植胚胎移植到兩頭代孕母豬體內(nèi),其中一頭懷孕。以上結(jié)果表明,羅米魯曲對豬體細(xì)胞核移植胚胎體外發(fā)育起到促進作用。2.本章研究兩種不同體外培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)的囊胚的質(zhì)量,分別命名為one-step和two-step培養(yǎng)系統(tǒng)。在one-step培養(yǎng)系統(tǒng)中,豬核移植囊胚在NCSU-37培養(yǎng)液中培養(yǎng)7天,在第5天更換1次培養(yǎng)液。在two-step培養(yǎng)系統(tǒng)中,豬核移植胚胎在NCSU-37培養(yǎng)液培養(yǎng)5天,之后更換到人誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)2天(共7天)。隨后,檢測兩種體外培養(yǎng)系統(tǒng)中培養(yǎng)的豬囊胚的形態(tài)和質(zhì)量。囊胚在one-step和two-step培養(yǎng)體系中,孵化的直徑、周長及面積的比率存在顯著性差異(3.01±0.20 versus 1.59±0.19, P0.01; 3.30±0.06 versus 1.38±0.18, P0.01; 10.23±0.33 versus 1.12±0.37, P0.01)。two-step培養(yǎng)系統(tǒng)中的囊胚形態(tài)上顯著優(yōu)于one-step培養(yǎng)系統(tǒng),而且two-step系統(tǒng)中囊胚細(xì)胞數(shù)是one-step系統(tǒng)中囊胚細(xì)胞數(shù)的3倍以上。這些結(jié)果表明人誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞培養(yǎng)液可以顯著提高豬體細(xì)胞核移植囊胚的形態(tài)和質(zhì)量。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S828

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本文編號：2798328