發(fā)布時間：2020-08-17 21:02

【摘要】：哺乳動物卵母細胞的成熟包含染色質(zhì)凝聚和分離等一系列復(fù)雜的生理事件,這些生理事件可能與組蛋白的甲基化修飾密切相關(guān)。組蛋白H3第4位賴氨酸三甲基化(Histone H3K4 trimethylation,H3K4me3)與轉(zhuǎn)錄激活相關(guān),組蛋白 H3第9位賴氨酸三甲基化(Histone H3K9 trimethylation,H3K9me3)抑制基因表達,兩種甲基化修飾的表達均受組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶和去甲基轉(zhuǎn)移酶的調(diào)控。毛殼素可特異性抑制組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SUV39H1/2和G9A基因的表達,降低H3K9me3水平。CPI-455是組蛋白去甲基轉(zhuǎn)移酶KDM5A和KDM5B的特異性抑制劑,可提高細胞中H3K4me3的表達。本研究采用毛殼素和CPI-455處理豬卵母細胞,分析相關(guān)基因表達的變化,了解組蛋白三甲基化修飾的改變對豬卵母細胞體外成熟和早期胚胎發(fā)育的影響,研究結(jié)果為深入了解組蛋白甲基化修飾在豬卵母細胞體外成熟的作用奠定基礎(chǔ)。1、調(diào)控H3K9me3表達對豬卵母細胞體外成熟和早期胚胎發(fā)育的影響。豬卵母細胞體外成熟0-22 h添加不同濃度毛殼素處理,結(jié)果顯示,與未處理組相比,2 nM毛殼素處理顯著提高了豬卵母細胞體外成熟率、4-細胞率和囊胚率(81.5%VS 72.62%,74.43%VS 68.69%,40.43%VS 27.48%,P0.05)。在不同時間段采用毛殼素處理時發(fā)現(xiàn),22-44 h和0-44 h分別添加毛殼素時,各組之間卵裂率、4-細胞率、囊胚率及囊胚細胞總數(shù)均無顯著差異(P0.05)。與未處理組相比,0-44h添加5nM毛殼素處理的成熟率顯著提高(87.39%VS 71.95%,P0.05)。免疫熒光結(jié)果表明,H3K9me3在GV期卵母細胞中有表達,在培養(yǎng)22 h以后的卵母細胞中無表達。與未處理組相比,0-22 h添加2 nM毛殼素處理可顯著降低囊胚中H3K9me3的表達(P0.5)。qRT-PCR結(jié)果表明,與未處理組相比,0-22h添加2nM毛殼素處理的卵母細胞中SUV39H1/2和G9A表達整體降低,囊胚中Nanog、Oct4、CDX2表達顯著提高(P0.05),囊胚細胞總數(shù)無差異(P0.05)。2、調(diào)控H3K4me3表達對豬卵母細胞體外成熟和早期胚胎發(fā)育的影響。豬卵母細胞體外成熟0-22 h添加不同濃度CPI-455處理,結(jié)果表明,與未處理組相比,5 μM處理顯著提高了豬卵母細胞體外成熟率和囊胚率(88.82%VS 78.20%,41.84%VS 28.4%,P0.05)。豬卵母細胞體外成熟不同時間段添加CPI-455處理時發(fā)現(xiàn),與未處理組和1 μM處理組相比,在體外成熟22-44 h添加5μM 處理的2-細胞率顯著降低(84.94%,86.34%VS 74.15%,P0.05);體外成熟0-44h添加CPI-455時發(fā)現(xiàn),各組之間的第一極體排出率、2-細胞率、4-細胞率、囊胚率和囊胚細胞總數(shù)均無顯著差異(P0.05)。免疫熒光結(jié)果顯示,與未處理組相比,0-22 h添加5 μM處理顯著了提高囊胚中H3K4me3的表達(P0.05)。qRT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),與未處理組相比,0-22 h添加5 μM處理降低了卵母細胞中KDM5A和KDM5B的表達(P0.05),顯著提高了囊胚中Nanog、Oct4、CDX2等多能性基因的表達(P0.05),囊胚細胞總數(shù)無差異(P0.05)。體外成熟0-22h同時添加毛殼素和CPI-455處理對卵母細胞體外成熟率和早期胚胎發(fā)育率無顯著影響(P0.05)。以上結(jié)果表明,適宜濃度的毛殼素、CPI-455處理可通過降低豬卵母細胞中SUV39H1/2和G9A、KDM5A和KDM5B基因的表達,上調(diào)囊胚中多能性基因的表達,進而提高豬卵母細胞體外成熟率和早期胚胎發(fā)育率。
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S828
【圖文】：

卵母細胞成熟的影響逡逑，組蛋白甲基化對早期胚胎發(fā)育和胚胎千細胞多能性的干細胞早期分化階段，Ｈ３Ｋ４ｍｅ３和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３對多能性表達具有重要的調(diào)控作用［４７］。在哺乳動物卵母細胞減數(shù)要作用。組蛋白修飾的中斷會導(dǎo)致有缺陷的染色體凝聚卵母細胞老化［４８］。豬卵母細胞生長階段，組蛋白Ｈ３在卵泡發(fā)育至竇腔期在Ｋ９位點發(fā)生甲基化。卵母細胞開Ｓ１０位點發(fā)生磷酸化，隨著染色體濃縮，在Ｋ９、Ｋ１４、Ｋ母細胞活化之后，隨著染色體的去凝集，組蛋白Ｈ３再上研究表明組蛋白尾修飾的調(diào)節(jié)可以控制多種細胞功能，腫瘤形成以及對ＤＮＡ損傷的反應(yīng)和修復(fù)所必需的基因Ｈ３Ｋ９ｍｅ３以及相關(guān)甲基化和去甲基化酶在卵母細胞成重要的調(diào)控作用。逡逑ＮＨ，邋Ｎｌｌ，＠邋ＮＨ）後！＞？Ｈ＇邐ＫＨ，邐ＮＨ，邐ＮＨ．＾邐叫瘦邋ＮＨ，珍逡逑今通今．．x�？丨丨偪？今巧？丨？＋ＧG＂幔鄭擼у巍ⅰ村義

本文編號：2795835