【摘要】：甘青烏頭為毛茛科烏頭屬植物唐古特烏頭Aconitum tanguticum(Maxim.)Stapf的干燥全草,為高山珍稀藥材,性涼味苦,具有清熱解毒,生肌燥濕的功效,其主要藥效成分為生物堿、苷類、揮發(fā)油等,其中生物堿具有廣泛的藥理活性。采用90%乙醇對(duì)甘青烏頭進(jìn)行提取,得率為17.65%,并用不同極性有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取分離,用藥效學(xué)技術(shù)方法觀察測(cè)定甘青烏頭醇提物(EE)、石油醚萃取部分(PE)、乙酸乙酯萃取部分(EA)、氯仿萃取部分(CH)、正丁醇萃取部分(BU)和水溶性部分(WA)對(duì)非特異性急、慢性炎癥反應(yīng)的影響,測(cè)定EE、PE、EA、CH、BU和WA對(duì)冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)和熱刺激痛閾的影響,比較分析其抗炎鎮(zhèn)痛作用;研究發(fā)現(xiàn)甘青烏頭具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用,醇提物具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛活性,初步篩選發(fā)現(xiàn)氯仿萃取部位是抗炎鎮(zhèn)痛的主要藥效物質(zhì)群,其他部位亦具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛活性,相對(duì)較弱。根據(jù)甘青烏頭抗炎鎮(zhèn)痛作用的藥效物質(zhì)主要集中在醇提物的氯仿萃取部位,并且發(fā)現(xiàn)含有生物堿,于是對(duì)甘青烏頭的總生物堿(TAA)進(jìn)行提取,并對(duì)TAA進(jìn)行定性定量分析和質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果顯示含生物堿(以烏頭堿計(jì))為0.3323%,建立了比較穩(wěn)定的TAA含量測(cè)定方法,并采用Box-Behnken Design設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案,以總生物堿和酯型生物堿含量為指標(biāo),在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,優(yōu)選TAA的提取工藝,獲得最佳工藝條件為提取溫度85℃,提取時(shí)間1.5h,乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)90%,液料比15:1,該工藝條件下TAA和酯型生物堿含量分別為0.5360g/100g提取物和0.5030μg/mg總堿,且重現(xiàn)性好,可作為TAA提取的新工藝。選擇兩種給藥途徑研究TAA對(duì)小鼠灌胃和腹腔注射時(shí)的急性毒性,并測(cè)定LD50,初步評(píng)價(jià)其安全性,研究發(fā)現(xiàn)TAA灌胃給藥的LD50為0.7456g/kg,TAA腹腔注射給藥的LD50為0.3358g/kg,研究證實(shí)TAA經(jīng)灌胃和腹腔注射對(duì)小鼠均具有一定的急性毒性,初步判斷TAA急性中毒的靶器官為植物神經(jīng)系統(tǒng)和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)系統(tǒng),中毒較快,持續(xù)時(shí)間較短。進(jìn)一步藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)TAA對(duì)非特異性急性炎癥反應(yīng)和慢性炎癥性組織增生具有明顯抑制作用,也具有一定的鎮(zhèn)痛作用。采用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)建立大鼠急性肺損傷(ALI)模型,研究TAA對(duì)ALI模型大鼠的治療作用及作用機(jī)制,結(jié)果表明TAA通過其抗炎活性保護(hù)肺功能,且無(wú)顯著的肺組織細(xì)胞毒性,TAA對(duì)LPS誘導(dǎo)的ALI的保護(hù)作用是通過改善肺組織病理變化,抑制NF-кB活化,減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、血管滲出等實(shí)現(xiàn)的,結(jié)果顯示抑制前炎癥轉(zhuǎn)錄因子NF-кB以及炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6和IL-1β是主要的作用機(jī)制,初步表明TAA可作為急性肺損傷的有效治療物質(zhì)。采用甲氨蝶呤誘導(dǎo)建立大鼠急性出血性腸炎(AHE)模型,研究TAA對(duì)AHE模型大鼠的治療作用及作用機(jī)制,研究發(fā)現(xiàn)TAA灌胃后能明顯改善AHE模型大鼠的一般狀況,改善組織形態(tài),降低血清TNF-α和NO含量,上調(diào)回腸組織勻漿DAO、ICAM-1和MPO水平,表明TAA可有效保護(hù)腸黏膜的機(jī)械屏障,具有良好的抗炎作用,初步表明TAA可作為急性腸炎的有效治療物質(zhì)。選擇常見致病菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa),糞腸球菌(Enterococcus faecalis)和白色念珠菌(Candida albicans)為研究對(duì)象進(jìn)行抗菌試驗(yàn),研究發(fā)現(xiàn)TAA對(duì)G+菌及G-菌抗菌活性較強(qiáng),而對(duì)真菌在1.0~10.0mg/m L范圍內(nèi)未發(fā)現(xiàn)明顯的抑制作用,TAA對(duì)金黃色葡萄球菌的抗菌效價(jià)最高,對(duì)大腸桿菌的效價(jià)最低。體外抗炎研究結(jié)果顯示,TAA可抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放NO和IL-1,有效減輕炎癥損傷,TAA在60-240mg/L范圍內(nèi)亦能明顯增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能,結(jié)果進(jìn)一步證明TAA有較強(qiáng)的抗炎作用。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S853.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2793440