【摘要】：牛傳染性鼻氣管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛皰疹病毒-1型(Bovine herpesvius 1,BHV-1)引起的一種牛的發(fā)熱型急性傳染病,又稱(chēng)為“紅鼻病”或“壞死性鼻炎”。目前國(guó)內(nèi)對(duì)IBR的防控主要依賴(lài)于滅活疫苗,但存在著諸多弊端,如用常規(guī)滅活劑--甲醛滅活病毒過(guò)程中,病毒表面天然蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,導(dǎo)致免疫后效果不佳,以及免疫保護(hù)期較短等問(wèn)題,均難以取得令人滿(mǎn)意的免疫效果。因此,尋找新型安全無(wú)刺激性的滅活劑和能夠有效延長(zhǎng)免疫保護(hù)期的疫苗佐劑或輔助佐劑,已成為當(dāng)前滅活疫苗研制中亟待解決的問(wèn)題。本研究的目的就是探究一種可替代甲醛的滅活劑,并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)納米微球?qū)BR滅活疫苗的免疫佐劑作用。這對(duì)IBRV新型滅活疫苗的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用提供了新的研究基礎(chǔ)與方向。本試驗(yàn)通過(guò)滅活時(shí)間和滅活濃度雙因素確定了聚維酮碘和甲醛的最優(yōu)滅活條件。以細(xì)胞盲傳三代觀(guān)察CPE、無(wú)菌檢驗(yàn)和臺(tái)盼藍(lán)染色等方法,篩選聚維酮碘的最佳滅活濃度和滅活時(shí)間。結(jié)果表明8%的聚維酮碘作用48 h可徹底滅活I(lǐng)BRV,0.3%的甲醛作用48 h時(shí)可徹底滅活I(lǐng)BRV。為了確定聚維酮碘對(duì)細(xì)胞的毒性,本研究向MDBK細(xì)胞培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的聚維酮碘和甲醛,比較二者對(duì)MDBK細(xì)胞毒性作用,結(jié)果表明0.5%的甲醛即可導(dǎo)致絕大多數(shù)細(xì)胞死亡,而18%的聚維酮碘對(duì)細(xì)胞無(wú)任何毒性,直到20%時(shí)才對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡。上述結(jié)果說(shuō)明,聚維酮碘可徹底滅活I(lǐng)BRV,與甲醛相比對(duì)細(xì)胞的毒性較小,可代替甲醛滅活劑制備滅活苗。為了探究聚苯乙烯納米微球(PS)作為輔助佐劑,承載IBRV后的免疫增強(qiáng)作用。本試驗(yàn)以EDC活化聚苯乙烯微球通過(guò)一步法偶聯(lián)IBRV,再以滅活偶聯(lián)后的IBRV制成滅活苗免疫昆明系小白鼠。通過(guò)間接ELISA方法對(duì)血清IgG進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,PS+206佐劑組抗體水平最高,免疫持續(xù)期最長(zhǎng),與206佐劑組、滅活苗+PS組和PS對(duì)照組這三組相比差異極顯著(P0.01)。流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)血液中CD4~+和CD8~+細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化,結(jié)果表明,注射PS+206佐劑組的小鼠血液中CD4~+和CD8~+T細(xì)胞亞群占總淋巴細(xì)胞的百分比最高,含量持續(xù)期最長(zhǎng),與206佐劑組相比差異極顯著(P0.01)。血清中IFN-γ、IL-4和IL-6測(cè)定結(jié)果表明,三種細(xì)胞因子的含量均是PS+206組最高,持續(xù)期最長(zhǎng),與206佐劑組、滅活苗+PS組和PS對(duì)照組這三組相比均差異極顯著(P0.01)。以上結(jié)果說(shuō)明,PS作為輔助佐劑可提高滅活苗的免疫效果,并能延長(zhǎng)機(jī)體免疫持續(xù)期,克服了傳統(tǒng)滅活苗免疫持續(xù)期短的難題。綜上所述,聚維酮碘可替代甲醛滅活I(lǐng)BRV,PS作為輔助佐劑可提高滅活疫苗的免疫效果,并延長(zhǎng)機(jī)體免疫持續(xù)期。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S852.4
【圖文】：

對(duì)照組細(xì)胞（200x）

c d圖 2-2 聚維酮碘在不同滅活條件下未徹底滅活 IBRV 導(dǎo)致細(xì)胞病變（200x）Fig. 2-2 Partially inactivated IBRV in povidone iodine oral solution under different inactivationconditions (200x)注：a:在 2%聚維酮碘滅活 24 h 的條件下，MDBK 細(xì)胞產(chǎn)生變大變圓的 CPE；b:在 4%聚維酮碘滅活 24 h 的條件下，c:MDBK 細(xì)胞產(chǎn)生變大變圓的 CPE；在 6%聚維酮碘滅活 24 h 的

c d圖 2-3 不同滅活條件下的聚維酮碘在盲傳三代后細(xì)胞未病變（200x）Fig. 2-3 Partially inactivated IBRV in povidone iodine oral solution under different inactivationconditions (200x)注：a:在 8%聚維酮碘滅活 IBRV 48 h 條件下，盲傳三代后 MDBK 細(xì)胞未發(fā)生 CPE；b:在 8%聚維酮碘滅活I(lǐng)BRV72 h 的條件下，盲傳三代后 MDBK 細(xì)胞未發(fā)生 CPE；c:在 12%聚維酮碘滅活 IBRV 48 h 的條件下，

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 萬(wàn)繼成;;河南省新蔡縣奶牛傳染性鼻氣管炎血清學(xué)調(diào)查[J];中國(guó)乳業(yè);2017年05期

2 周慧芳;洪敏;王夢(mèng)甜;單佳雯;吳建宇;楊立偉;何徐軍;;聚維酮碘溶液對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的滅活作用研究[J];浙江醫(yī)學(xué);2016年24期

3 李永琴;趙世媛;牛耀祖;何小麗;李凡飛;溫萬(wàn);許立華;;寧夏地區(qū)奶牛場(chǎng)牛傳染性鼻氣管炎的血清學(xué)調(diào)查[J];畜牧與獸醫(yī);2016年10期

4 雷元元;何生虎;郭亞男;馬燁;曹思婷;白曉南;;甲醛滅活牛支原體的條件探究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2015年21期

5 ;安多福研制出創(chuàng)新型非抗生素類(lèi)新獸藥——“萬(wàn)金水”聚維酮碘口服液[J];廣東經(jīng)濟(jì);2015年10期

6 梁宏儒;高佳濱;李安;陳為宏;喬波;尹輝;胡旭;趙達(dá);姜東君;朱戰(zhàn)波;;牛傳染性鼻氣管炎的分離鑒定和滅活條件的優(yōu)化[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào);2013年06期

7 楊有武;;牛傳染性鼻氣管炎病毒的分離鑒定及gD基因序列分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年06期

8 宋文超;金業(yè);吳文浩;張煒;姚火春;;傳染性牛鼻氣管炎病毒分離鑒定及特性分析[J];畜牧與獸醫(yī);2012年06期

9 唐艷濤;卞麗娜;王春;馬黎黎;;分散聚合法制備亞微米級(jí)單分散聚苯乙烯微球[J];遼寧化工;2011年04期

10 劉全離;;聚維酮碘體外抑菌效果試驗(yàn)觀(guān)察[J];中國(guó)消毒學(xué)雜志;2008年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 李河林;IBRV XA株的分離鑒定及其gD蛋白的原核表達(dá)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

2 葉平;奶牛關(guān)節(jié)炎透皮治療藥物的研制及藥效學(xué)評(píng)價(jià)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

本文編號(hào)：2784368